胃伤害性刺激诱导大鼠脑干星形胶质细胞GFAP蛋白表达及其与神经元的关系

研究大鼠在福尔马林诱发胃伤害性刺激时脑干内星形胶质细胞及神经元的变化。应用免疫组织化学三重标记法在脑原位切片同时显示脑干内Fos蛋白,胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）,酪氨酸羟化酶（TH）的表达,结果显示：1、在福尔马林诱发胃伤害性刺激后,脑干胶质细胞GFAP表达阳性,并表现出明显的核团或亚核定位特点,在延髓内脏带（MVZ0,中缝大核（RMg),蓝斑（LC）,臂旁外侧核（LPB）,中缝背核（DR）,中脑导水管周围灰质腹外侧区（vlPAG),上丘中灰层（IngSC)等脑区有较多的Fos阳性细胞,而且Fos阳性表达的分布与上述GFAP阳性分布基本一致;2、MVZ,LC,DR,vlPAG等部位有大量Fos及TH双标阳性神经元,周围有密集的GFAP阳性细胞;3、随着刺激后存活时间的变化,GFAP与Fos阳性细胞的反应均经历逐渐升高后又渐降低直至消失的变化。结果表明：上述核团的神经元和星形胶质细胞可能同时参与了内脏痛及其调节过程。     

大鼠“延髓内脏带”向缰核投射的儿茶酚胺能神经元对躯体伤害性刺激的Fos表达

为了研究大鼠“延髓内脏带”投射至缰核之儿茶酚胺能神经元在躯体伤害性刺激后的c－fos表达,使用了WGA－HRP逆行追踪法与抗Fos和抗酪氨酸羟化酶（TH）免疫组织化学染色结合的三重标记方法。将WGA－HRP定位注射入右侧缰核,48h后向右前爪跖部皮下注射50ml8％For－malin,2h后动物被处死,用500ml含4％多聚甲醛的0．1mol／L磷酸缓冲液（PB,pH7．4）灌流固定。取出WGA－HRP注射区,脊髓颈段和延髓,切制连续冠状冰冻切片（厚40μm）。首先用四甲基联苯胺（TMB）对WGA－HRP注射区和延髓切片进行组织化学反应,然后脊髓和延髓切片先进行抗Fos的免疫组化染色,延髓切片再进行抗TH的免疫组化反应。结果在光镜下于延髓内脏带区观察到七种标记神经元,即Fos、TH抗标记神经元,HRP逆行标记神经元;Fos／HRP、Fos／TH、HRP／TH双标记神经元。和Fos／HRP／TH三标记神经元。本文结果证明：延髓内脏带内某些投射至缰核的儿茶酚胺能神经元可能参与躯体伤害性刺激的传导和调控。     

大鼠延髓至下丘脑腹内侧核的儿茶酚胺能投射神经元在胃伤害性刺激后的Fos表达

本实验用ＨＲＰ注入下丘脑腹内侧核结合逆行追踪与抗ＦＯＳ蛋白和抗酪氨酸羟化酶（ＴＨ）抗血清双重免疫细胞化学相结合的三重标记方法,对大鼠孤束核和延髓腹外侧区至下丘脑腹内侧核的儿茶酚胺能投射神经元在胃伤害性刺激后的ｃ－ｆｏｓ表达进行了观察。本文发现孤束核和延髓腹外侧区有七种不同的标记细胞：ＨＲＰ、Ｆｏｓ、ＴＨ单标细胞Ｆｏｓ／ＨＲＰ、Ｆｏｓ／ＴＨ、ＨＲＰ／ＴＨ双标细胞和Ｆｏｓ／ＨＲＰ／ＴＨ三标细胞。上述七种标记细胞主要分布在延髓中段和尾段孤束核的内侧亚核和延髓腹外侧区以及两者之间的网状结构。ＨＲＰ标记细胞以注射侧为主,对侧有少量分布。本文结果证明,大鼠孤束核、延髓腹外侧区和网状结构内儿茶酚胺能神经元有些至下丘脑腹内侧核的投射,其中一部分儿茶酚胺能神经元参与了胃伤害性刺激的传导和调控。     

电针足三里穴对糖尿病胃轻瘫大鼠延髓多巴胺能神经元和 星形胶质细胞活性的影响

目的:研究电针足三里穴对糖尿病胃轻瘫大鼠延髓多巴胺能神经元内酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和星形胶质细胞内胶质原纤维酸性蛋白(Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP)表达的影响。方法:32只实验大鼠分为空白对照(空白)组、糖尿病胃轻瘫模型(模型)组、模型组+电针足三里穴(足三里)组和模型组+电针非经非穴(非经非穴)组(每组8只)。模型制备采用腹腔注射5%四氧嘧啶和熟地灌胃诱导的方法。实验3周后取大鼠延髓进行抗TH和抗GFAP的单一和双重免疫组化染色,观察并记数TH和GFAP在延髓内的表达。结果:与空白组比较,各实验组TH阳性多巴胺能神经元和GFAP阳性星形胶质细胞集中表达于延髓迷走孤束复合体内,有明显的定位特点;高倍镜下观察到TH阳性神经元周围有大量GFAP阳性星形胶质细胞包绕。各组TH和GFAP表达以模型组最高;而足三里组TH阳性多巴胺能神经元数量明显减少(31.3±4.4→16.8±3.2),GFAP阳性产物表达明显降低(113.8±7.6→95.4±8.4),且它们之间有统计学意义(P<0.01);非经非穴组与模型组之间差异没有统计学意义。结论:针刺调节糖尿病胃运动功能障碍大鼠与其调控延髓多巴胺能神经元及其周围的星形胶质细胞功能活动有关。     

猴及人胎儿延髓内脏带的化学神经解剖学

本实验采用免疫组织化学ＡＢＣ法,观察儿茶酚胺类（以酪氨酸羟化酶－ＴＨ作标记物）、５－羟色胺及神经肽（Ｐ物质、亮氨酸－脑啡肽、胆囊收缩素、神经肽Ｙ、生长抑素）在猴及人胎儿延髓内脏带的分布及形态特点。结果发现,上述物质均程度不同地集中分布于猴及人胎儿延髓内脏带,即位于延髓中尾段的一条从背内侧至腹外侧的弧形带状区。这表明猴及人胎儿延髓内脏带是一个相对独立的机能结构区,其化学构筑具有独特特点。     

百草枯和代森锰所致帕金森病小鼠黑质GFAP的表达变化

目的:研究联合应用百草枯(Paraquat,PQ)和代森锰(Maneb,MB)对帕金森病(Parkinson′s disease,PD)小鼠脑黑质神经胶质原纤维酸性蛋白质(Glial fibrillary acldic protein,GFAP)的表达变化。方法:PQ/MB建立C57BL/6J小鼠PD模型,利用免疫组化方法观察不同时间点小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)和GFAP表达变化及相互关系。结果:模型组黑质致密部(Substantial nigra pars compacta,SNpc)区残留的TH阳性神经元呈进行性下降趋势,显著低于对照组的相应时间点(P＜0．01),黑质区星形胶质细胞反应性增多并呈现明显活化状态。结论:PO/MB能诱导小鼠产生渐进性且不可逆的PD样改变,星形胶质细胞可能参与多巴胺能神经元的病理损伤过程。     

大鼠孤束核内脑啡肽样免疫反应阳性结构及其轴突终末的突触联系

本文应用免疫细胞化学方法在光镜与电镜下观察了大鼠孤束核内脑啡肽样免疫反应（ＥＮＫ－ＬＩ）阳性结构的分布特征和ＥＮＫ－ＬＩ轴突终末的突触联系以及非突触性关系。结果表明：（１）经秋水仙素处理的大鼠,其孤束核内有许多ＥＮＫ－ＬＩ胞体的分布;而未经秋水仙素处理的大鼠,其孤束核内可见密集的ＥＮＫ－ＬＩ纤维与终末;ＥＮＫ－ＬＩ胞体、纤维和终末主要分布于锥体交叉平面至闩平面的孤束核内侧亚核与胶状质亚核。（２）ＥＮＫ－ＬＩ阳性产物主要定位于小圆形清亮囊泡外表面、大颗粒囊泡内和线粒体外表面等处。（３）ＥＮＫ－ＬＩ轴突终末主要与阴性树突形成轴－树突触。（４）阴性轴突终末终止于ＥＮＫ－ＬＩ轴突终末上,形成轴－轴突触。（５）ＥＮＫ－ＬＩ轴突终末与阴性轴突终末形成非突触性的轴－轴并靠。以上结果提示孤束核内的ＥＮＫ－ＬＩ神经成分主要通过突触后机制、也不排除突触前作用,参与孤束核中内脏信息的整合过程,而且这一作用又受到非ＥＮＫ－ＬＩ神经成分的调控。     

甘珀酸对内脏痛大鼠延髓星形胶质细胞和神经元反应的影响

目的:研究侧脑室注射甘珀酸后对福尔马林灌胃致内脏疼痛大鼠的延髓迷走孤束复合体内星形胶质细胞和神经元反应的影响.方法:经侧脑室注射缝隙连接阻断剂甘珀酸(carbenoxolone,CBX)后向大鼠胃内灌入2.5%福尔马林2ml诱发内脏疼痛,用免疫组织化学方法观察延髓迷走孤束复合体(VSC)内抗Fos蛋白(标记神经元)和抗胶质原纤维酸性蛋白(标记星形胶质细胞)的单一或双重标记的免疫荧光染色.结果:福尔马林灌胃后大鼠出现烦躁易激惹,呼吸变快,持续1h;而预先侧脑室注射CBX则动物疼痛行为学反应明显减轻.免疫组织化学染色发现福尔马林灌胃后大鼠VSC中的Fos免疫反应数目增强;大鼠预先侧脑室注射CBX后VSC中的Fos免疫反应数目明显减弱.结论:延髓VSC中的星形胶质细胞和神经元参与福尔马林灌胃致内脏痛的调节,星形胶质细胞可能通过缝隙连接影响神经元对内脏痛的调节功能.     

哮喘豚鼠肺内SP受体分布的免疫组织化学研究

为探讨哮喘豚鼠肺内SP受体（SPR）的表达[及分布,将豚鼠分成哮喘组和对照组,利用SPR特异性抗血清,免疫组织化学ABC法,葡萄糖氧化酶-DAB-镍染色和计算机图象分析技术。结果显示;与对照组相比,哮喘豚鼠肺内支气管至终末细支气管SPR免疫反应（SPR-IR）阳性产物显浓密,以平滑肌层和粘膜层为。此外,在哮喘组豚鼠而不是对照组豚鼠的呼吸性细支气管壁也有SPR-IR阳性分布。结果表明：SPR表达上调在哮喘的发病过程中起一定作用。