蓖麻RcTUBβ1基因的克隆和原核表达

微管蛋白基因(Tubulin)具有高度的保守性,常作为目标基因相对表达量研究时的内参基因.本研究旨在通过构建蓖麻(Ricinus communis L.)RcTUBβ1基因的原核表达载体pET32a(+)-RcTUBβ1并优化表达工艺以表达融合蛋白His-RcTUBβ1.以蓖麻雌花为材料,通过RT-PCR技术,扩增得到含酶切位点BamHⅠ和Xho Ⅰ 的 RcTUBβ1 基因(GenBank Accession number:XM_002509734.3)的ORF 序列,经双酶切构建原核表达载体pET32a(+)-RcTUBβ1,将pET32a(+)-RRcTUBβ1转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中诱导表达,并考察诱导时间、诱导温度、诱导IPTG浓度对表达的影响.结果表明,所获得的蓖麻RcTTUBβ1 ORF序列与GenBank中的序列一致,长度为1 341 bp,未发生移码突变.IPTG可诱导产生分子量约为68kDa的融合蛋白,最优表达条件为诱导温度28℃、诱导时间7 h和IPTG 0.5 mmol/L,融合蛋白主要以包涵体的形式存在.这为纯化融合蛋白以制备其抗体,用以研究RcTUBβ1的免疫组织化学分布及时空表达模式提供了基础.     

尼莫地平对卒中型自发性高血压大鼠血液流变学的改善作用

尼莫地平治疗急慢性脑血管病有一定效果,我们以往的实验也表明尼莫地平可预防或延缓卒中型自发性高血压大鼠(SHRsp)脑卒中的发生。本实验目的是了解尼莫地平对SHRsp血液流变学有关指标的影响,以进一步探索其抗卒中作用的机制。 实验动物是从美国引进在本院繁育的第9代雌性SHRsp,大鼠自由食标准饲料,饮1％NaCl盐水。将大鼠随机分为治疗组(n=14)和对照组(n=16)。治疗组用尼莫地平30mg·kg~(-1)·d~(-1)拌入少量碎食中喂,治疗3周;对照组仅喂同等量碎食。治疗前及治疗后第3周用尾套法(上海大鼠血压仪)各测1次收缩压及心率,并测体重。治疗3周末用乙醚麻醉大鼠,开胸取心腔血4ml,测定全血粘度(锥板法)、血浆粘度(锥板法)、血细胞