慢病毒介导的RNAi对大鼠SOCS3基因表达的抑制作用

目的研究慢病毒表达载体介导的RNA于扰（RNAi）对大鼠下丘脑细胞中细胞因子信号转导抑制因子3（SOCSB）的抑制作用。方法根据大鼠SOCS3基因（NM053565）,用Ambion在线软件选择3个靶序列,设计并合成包含各正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,与经BamHI和XhoI酶切后的慢病毒载体质粒pRNA-1enti-GFP连接产生pRNA-Lenti-SOCS3-GFP慢病毒重组质粒,与慢病毒包装混合物共转染293T细胞,包装产生慢病毒,收集病毒上清,采取逐孔稀释滴度法测定病毒滴度,然后转染大鼠下丘脑细胞,通过荧光显微镜观察细胞转染情况,利用荧光实时定量PCR方法检测RNAi组（siRNAl,siRNA2,siRNA3）、空白细胞组和阴性序列组（siRNA—Negtive）中SOCS3的表达情况。结果将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功。系列稀释法检测慢病毒悬液的滴度为1．0×10^10TU／L。荧光实时定量PCR检测显示慢病毒感染大鼠下丘脑细胞后,与空白细胞组相比,3个RNAi组都有不同程度的抑制SOCS3表达,其中siRNAI组的抑制效果最好,可使SOCS3mRNA表达下调达80％。结论构建的pRNA-Lemi-SOCS3-GFP慢病毒载体可有效地抑制大鼠SOCS3的表达,为以SOCS3基因为靶点的相关疾病的基因治疗研究奠定基础。     

绝经对血液单核细胞基因表达谱的影响:基因芯片初步研究

绝经是女性一生中很重要的生理现象之一,它能增加一系列复杂免疫、神经退化、新陈代谢和心血管方面的疾病。血液单核细胞能分化成各种各样的细胞,这些细胞在组织形态发生和免疫应答方面起着很重要的作用。本研究中采用了包含大约14,500个基因探针的Affymetrix Human U133A基因芯片来研究健康的绝经前和绝经后女性外周血液单核细胞中的基因表达谱。样本之间的对比分析表明有20个基因上调,20个基因下调。其中的28个基因根据它们的生物过程如细胞繁殖、免疫应答、细胞代谢等等被分成了6个主要的GO类别;剩下的12个基因其生物学功能还没有被鉴定。研究结果支持了我们的假设:血液单核细胞的功能状态确实受到绝经的影响,而且由此带来的改变可能是由全基因组范围的基因表达谱而决定的。本研究中鉴定的一些差异表达基因有可能作为以后研究与绝经相关的系统免疫、神经退化和心血管疾病的候选基因研究。此工作是这个研究方向的第一次尝试,为将来的进一步研究奠定了基础。     

飞秒激光辅助全板层角膜移植术治疗圆锥角膜临床观察

目的:评价飞秒激光辅助全板层角膜移植治疗圆锥角膜患者早期临床效果。方法:回顾性分析。15例17眼圆锥角膜患者均采用飞秒激光辅助联合Anwar大气泡技术暴露后弹力层的角膜移植手术。术前17只眼均测量裸眼视力(Uncorrected visual acuity,UCVA)、最佳矫正视力(Best corrected visual acuity,BCVA)、角膜内皮细胞计数(endothelial cell density,ECD)、角膜中央平均厚度、角膜曲率1(K1)、角膜曲率2(K2)、角膜地形图角膜散光度数和眼压(intraocular pressure,IOP)。所有患者随访时间为术后第1周、第1月、第2月和第3月。结果:到第3月时,UCVA和BCVA均有明显提高。测量中央角膜中央厚度为(493.0±46.80)μm;角膜曲率已接近正常水平,K1和K2平均值分别为(44.56±4.86)D和(40.22±3.60)D,以上数据与术前相比,差异均具有统计学意义(P0.001)。散光值下降至(4.57±3.60)D(P=0.185,P0.05)。角膜内皮细胞丢失率为14.3%。术后眼压均正常。结论:飞秒激光辅助全板层角膜移植治疗圆锥角膜患者早期临床效果明显,具有精确性、安全性和可预测性。     

小麦矮秆圆粒突变体的鉴定与分析

小麦的子粒形态性状和株高与小麦的产量密切相关,是育种的重要选择目标性状。本研究通过对小麦品种偃展1号(YZ1)EMS突变体W98的农艺性状的调查与分析,发现W98的株高只有24 cm,而野生型YZ1的株高是73 cm。突变体株高的变异是由每个节间长度变短造成的,而非节间数目减少所致。相关分析表明矮秆与圆粒性状呈显著相关。利用高秆长粒的墨西哥品种10th12与突变体W98配制杂交组合,获得1544个F2∶3单株(株系),通过对分离群体的遗传分析,发现圆粒性状是由1对不完全显性基因控制的。赤霉素(GA)与油菜素内酯(BR)激素敏感性试验表明:野生型和突变体都对GA处理不敏感;不同浓度BR的展叶试验表明野生型对BR不敏感,而突变体W98对BR敏感。     

巴西橡胶树中小檗碱桥酶HbBBE1在逆境胁迫中的作用（英文）

小檗碱桥酶(BBE,EC1. 5. 3. 9)是小檗碱生物合成中的关键酶。通过PCR扩增,克隆了橡胶树中HbBBE1基因。HbBBE1的启动子区域含有光、赤霉素、水杨酸、机械伤害、真菌诱导子、防御和应激反应元件。通过预测发现,HbBBE1蛋白质含有一个信号肽、一个跨膜区域、FAD结合结构域和特异性BBE结构域,它与木薯中的具有相同残基的BBE蛋白质具有80. 1%的相似性。分析HbBBE1基因在橡胶树不同组织中的表达发现,其在乳胶中的表达量最高。白粉病侵染、干旱、高强度光照、过氧化氢、未割胶树割胶处理和机械伤害处理都能显着上调HbBBE1的表达。此外,外源激素赤霉酸、水杨酸、乙烯利、茉莉酸甲酯和脱落酸处理也均可显著诱导HbBBE1的表达。在这些处理中,HbBBE1被赤霉酸刺激后表达量迅速升高,且在0. 5 h达到最大值(6. 3倍)。在脱落酸、乙烯利和过氧化氢等处理下,HbBBE1的表达显著;与未处理的对照相比,其表达倍数达数十倍。综上所述,我们的研究表明HbBBE1在响应橡胶树中的生物和非生物胁迫中起多种作用。     

妊娠期糖代谢异常对新生儿出生结局的影响

目的：探讨妊娠期不同程度的糖代谢异常对胎儿发育及结局的影响。方法：前瞻性收集我院2009年1月至2010年1月分娩的糖代谢异常的331例单胎妊娠孕妇,分为糖筛查异常组69例、糖耐量异常组126例、妊娠期糖尿病（Gestaional DiabetesMellitus,GDM）组136例,并选择同期糖代谢正常的751例单胎孕妇为对照组,比较四组新生儿出生的最终结局。结果：糖筛查异常组与对照组新生儿结局差异无显著性意义（P〉0.05）;糖耐量异常组中巨大儿及新生儿窒息、早产儿的发生率与对照组差异有显著性意义（P〈0.05）;GDM组与对照组差异有显著性意义（P〈0.05）。结论：母亲妊娠期不同程度的糖代谢异常对新生儿影响不同。口服葡萄糖耐量试验（Oral Glucose Tolerance Test,OGTT）异常与GDM一样对新生儿发育及结局均有影响,可使巨大儿、新生儿窒息、早产儿的发生率增高。     

银杏内酯B 诱导大鼠骨髓间充质细胞分化为神经元样细胞的电生理研究

目的:研究银杏内酯B(GB)诱导大鼠骨髓间充质细胞(MSCs)分化为神经元样细胞的电生理特性。方法:应用膜片钳技术,采用全细胞记录方式,对由GB诱导的大鼠MSCs进行诱导前后的电生理功能测定。结果:分化后的神经元样细胞较诱导前细胞的膜特性有了显著改变(P<0.05)。结论:大鼠MSCs经过GB诱导能够向功能性神经元方向分化。     

急性心肌梗死患者血清Hcy、hs-CRP、Cys-C水平变化及临床意义

目的:评价心肌梗死患者血清同型半胱氨酸(Hcy)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)及胱抑素C(Cys-C)水平变化及临床意义。方法:对急性心肌梗死(AMI)组66例患者血清Hcy、hs-CRP、Cys-C水平进行测定,并与正常对照组的40例健康受试者进行比较分析。结果:AMI组血清Hcy、hs-CRP、Cys-C水平均显著高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);且AMI组血清Hcy、hs-CRP、Cys-C两两之间均呈正性显著相关。结论:检测AMI患者血清Hcy、hs-CRP、Cys-C水平对患者病情评估及治疗措施的选择具有重要的临床意义。