槲皮素对节律钟基因的调控研究*

目的:探讨槲皮素对节律钟基因表达的影响。方法:通过50%的马血清刺激诱导人骨肉瘤U2OS细胞同步化,利用槲皮素处理同步化后的U2OS细胞。进一步利用荧光定量PCR检测节律钟关键基因的变化。利用western blot检测槲皮素对组蛋白乙酰化的影响,并且通过试剂盒测定槲皮素对细胞内氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的影响。通过尼克酰胺和槲皮素同时处理U2OS细胞,利用荧光定量PCR检测节律钟关键基因的变化。结果:U2OS细胞经过槲皮素处理后节律钟关键基因芳烃受体核转位蛋白3(brain and muscle Arnt-like protein-1,BMAL1),节律周期蛋白2(Period 2, PER2),孤儿核受体alpha(REV-ERBα)和蓝光受体蛋白1(Cryptochrome 1,CRY1)在转录水平的表达水平有明显的升高。槲皮素处理可以显著降低U2OS细胞的组蛋白乙酰化的水平,并且显著升高U2OS细胞内的氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的水平。进一步研究发现,尼克酰胺(Nicotinamide,NAM)处理完全抑制了槲皮素对节律基因的影响。结论:槲皮素显著地激活了节律钟关键基因的mRNA表达水平,槲皮素对于节律基因的调控依赖于Sirtuins的活性,其机制可能是由于槲皮素增加了细胞内的氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的水平所导致。     

亚麻酸对肝癌细胞HepG2节律的调控研究

目的:探讨多不饱和脂肪酸亚麻酸对肝癌细胞HepG2节律钟的影响。方法:通过50%的马血清刺激诱导HepG2细胞同步化,利用亚麻酸处理同步化后的HepG2细胞。进一步利用荧光定量PCR和western-blot检测节律钟关键基因的变化。结果:HepG2细胞经过亚麻酸处理后节律钟关键基因芳烃受体核转位蛋白3(brain and muscle Arnt-like protein-1,BMAL1)和蓝光受体蛋白1(Cryptochrome 1,CRY1)在转录水平的表达水平有所降低。与此一致的是,在蛋白质水平CRY1和BMAL1的表达同样受到亚麻酸的抑制。同时发现,CRY1的转录水平的节律周期有明显的缩短。进一步研究发现,亚麻酸对HepG2细胞的脂肪酸合成关键基因脂肪酸合酶(Fatty acid synthase,FASN)和硬脂酰辅酶A脱氢酶(Stearoyl-CoA desaturase 1,SCD1),以及免疫促炎因子白细胞介素-6(Interleukelin-6,IL-6)和白细胞介素-8(Interleukelin-8,IL-8)的mRNA的表达具有明显的抑制效应。结论:亚麻酸影响了肝癌HepG2细胞水平的节律基因的表达水平以及缩短了节律基因的周期,并且对于HepG2细胞的脂肪酸合成以及免疫促炎因子有明显的抑制效应。