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该文旨在探讨过表达肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptorassociated factor 6,TRAF6)对人急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞自噬活性的影响。利用基因表达数据库GEO分析TRAF6在AML患者白血病细胞中的mRNA表达水平。通过癌症基因组图谱TCGA分析TRAF6表达与AML患者临床预后的关系。将TRAF6重组质粒载体转染人AML细胞系(KG-1a和THP-1),采用自噬激活剂雷帕霉素(Rapamycin)和自噬相关抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)、巴弗洛霉素A1(bafilomycin A1,Baf-A1)分别处理AML细胞。荧光定量PCR、蛋白免疫印迹技术检测过表达TRAF6后白血病细胞自噬标志物(LC3和p62)mRNA和蛋白水平;免疫荧光方法检测LC3绿色荧光斑点结构(puncta);流式细胞术检测细胞凋亡率;CCK-8实验检测AML细胞的体外增殖能力。结果显示,AML患者白血病细胞高表达TRAF6(P<0.01);TRAF6高表达的白血病患者总体生存率和无事件生存率均较TRAF6低表达组显著降低(P=0.01)。TRAF6重组质粒转染能够显著增加两株AML细胞系中TRAF6的mRNA和蛋白水平(P<0.05)。Rapamycin处理能够激活AML细胞系自噬水平,过表达TRAF6后AML细胞LC3 mRNA和LC3II蛋白水平表达上调(P<0.05)、p62 mRNA和蛋白水平下调(P<0.05)以及LC3 puncta聚集增多。用Baf-A1处理以阻断过表达TRAF6的白血病细胞系中的自噬流后,LC3II蛋白表达水平显著提高(P<0.05)。3-MA处理过表达TRAF6的白血病细胞后,LC3II蛋白表达减少、p62蛋白表达增加(P<0.05)。此外,过表达TRAF6降低白血病细胞凋亡率和促进细胞的体外增殖(P<0.001),而过表达TRAF6后联合3-MA处理则可逆转TRAF6对白血病细胞的抗凋亡和促增殖作用(P<0.001)。以上研究结果提示,过表达TRAF6能够增强AML细胞的自噬活性,促进AML细胞的生长。 相似文献
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本文旨在明确糖尿病肾小管间质中Notch1和自噬水平的变化对细胞外基质沉积的影响,并探讨其机制。取db/m小鼠(正常对照组)和db/db小鼠(糖尿病组)各8只,饲养12周后测定相应的生化指标;同时,体外在正常糖(normal glucose, NG)和高糖(high glucose, HG)条件下培养大鼠肾小管导管上皮细胞(NRK52E细胞),用Western blotting检测各组细胞中Notch1和LC3蛋白表达变化;在NG和HG条件下过表达和敲低Notch1,用共聚焦显微镜观察自噬流变化,用细胞免疫荧光化学法观察肾小管上皮细胞中Notch1、I型和III型胶原蛋白(Collagen-I和III)变化。结果显示,与db/m小鼠比较,db/db小鼠肾组织中Notch1和Collagen-III表达增加(P <0.01),而LC3表达降低(P <0.05);体外实验结果显示,HG组与NG组比较,NRK52E细胞Notch1蛋白表达增加(P <0.01),LC3表达明显降低(P <0.01),高渗组与NG组比较,以上蛋白表达无明显变化;高糖条件下敲低Notch1... 相似文献
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