准噶尔雅罗鱼β-肌动蛋白基因启动子的克隆及其活性功能初步检测

以开发利用新疆濒危鱼类准噶尔雅罗鱼(Leuciscus merzbacheri)基因资源为研究目的, 利用PCR技术克隆准噶尔雅罗鱼的β-actin 基因, 得到的β-actin 基因片段SZ21包含启动调控区, 大小为2 398 bp。SZ21的启动调控区包括β-actin 基因上游调控序列、第1、第2、第3和第4外显子部分序列。上游调控序列中含有对转录起重要作用的CAAT框、TATA 框和CArG 框等元件。对启动子序列在线分析表明, 获得的启动子含有E-box、RU49、ZBPF、CEBP、CREB等多个重要转录因子结合位点。用AatⅡ破坏真核表达载体pEGFP-N1-AFPⅢ中的CMV启动子, 将准噶尔雅罗鱼的SZ21启动调控区克隆到载体pEGFP-N1-AFPⅢ(CMV坏)上, 构建成重组表达载体β2 pEGFP-N1-AFPⅢ。脂质体转染BHK-21细胞。结果表明, 克隆的准噶尔雅罗鱼β-actin基因启动子SZ21具有启动EGFP报告基因在哺乳动物细胞中表达的活性。通过BHK-21绿色荧光细胞的传代证实, 克隆的启动子具有持续启动蛋白基因表达的活性, 在细胞传代中可以遗传。PCR检测传代的BHK-21绿色荧光细胞基因组DNA, 均能检测到SZ21目的片段。文章成功分离了具有活性功能的准噶尔雅罗鱼β-actin基因启动子。     

速灭威在枸杞土壤中的迁移及淋溶行为模拟研究

应用薄层层析法和柱淋洗法研究了速灭威在3种枸杞产区土壤——灌淤土、灰钙土和潮土中的迁移及淋溶特性, 并探讨了土壤类型、pH值、淋溶量等因素对其淋溶的影响。结果表明: 速灭威在三种枸杞产区土壤中的移动性由大到小依次为: 灰钙土>潮土>灌淤土, 比移值Rf分别为0.47、0.37和0.35, 移动速率m/(cm·h–1/2)分别为3.52、2.58和2.35。速灭威在三种土壤中的比移值Rf在0.35—0.64之间, 属于中等移动农药。速灭威在三种土壤中的淋出率由大到小依次为: 潮土>灰钙土>灌淤土, 淋出率分别为63.1 %、50.0 %和28.3 %。随着水量的增加, 速灭威在三种土壤中的淋溶率也越来越大。当淋溶水量大于350 mL时, 除潮土外, 灌淤土和灰钙土中几乎无速灭威流出, 进一步证明了速灭威可能在潮土中的吸附力较低, 而在灌淤土和灰钙土中的吸附力较高。淋溶液pH值不同, 淋溶率也有较大差异, 在灌淤土和灰钙土中弱酸性条件利于速灭威淋出, 在潮土中性条件易于淋出, 这可能与土壤的pH及全盐量含量不同有关, 在弱酸性条件下, 潮土的全盐量含量高, 增大了对速灭威的吸附力, 导致速灭威的淋溶率降低。速灭威在土壤中属于中等移动农药, 对地下水存在一定的危险。     

准噶尔雅罗鱼β-肌动蛋白基因启动子克隆及序列分析

利用PCR方法克隆了准噶尔雅罗鱼(Leuciscus merzbacheri)的β-actin基因启动子片段SZ21,大小是2398bp。对克隆的启动子序列进行了转录调控元件的生物信息学预测分析,同时,基于启动子中包含的开放阅读框和内含子序列,探讨了准噶尔雅罗鱼与鲤鱼(Cyprinus carpio)、草鱼(Ctenopharyngodon idella)、青鱼(Mylopharyngodon piceus)、团头鲂(Megalobrama amblycephala)、泥鳅(Misgurnus mizolepis)间的系统进化关系。结果显示,该启动子序列的3个核心启动子转录元件:CAAT-box、CArGmotif和TATA-box分别在转录起始位点(+1)上游的-89、-59、-26处,序列中还含有MEF2、SATB、CHRF、INRE、MTEN、E-box、RU49、ZBPF、CREB、Enhance region、CEBP位点等多种转录调控元件。在剪接体内含子中,剪接位点遵循GT…AG法则。启动子SZ21序列含有3个内含子和155个氨基酸。内含子1、内含子2、内含子3的系统发育分析表明,团头鲂与草鱼和青鱼的亲缘关系要比与准噶尔雅罗鱼的更近一些,这与传统分类中的亲缘关系显示不一致,其原因尚需探讨。