不同频率间歇性低氧刺激对HT22细胞活性和Hif-1α及p-NF-κB表达的影响

间歇性低氧(intermittent hypoxia,IH)可通过氧化应激和炎症反应诱导认知障碍,而不同频率的IH刺激可对特定类型的细胞引起不同结果。因此本研究旨在比较3种频率IH刺激对海马神经元HT22细胞活性的影响,探讨IH刺激损伤神经元的相关分子机制。体外培养HT22细胞,分为对照组和3个不同频率IH刺激组(舱内氧浓度在21%和1%之间循环,IH1组:6循环/h;IH2组:2循环/h;IH3组:0.6循环/h)。分别在IH刺激6、12、24和48h观察细胞形态,采用CCK-8试剂盒测定细胞活性,用试剂盒测定细胞上清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量,用DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,用Western blot检测低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,Hif-1α)和核因子κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)的表达水平。结果显示,与对照组相比,3个IH处理组细胞数量均减少。随IH刺激时间延长,IH处理组细胞活性均呈现不同程度的降低,细胞培养基上清中LDH含量增加,细胞内ROS水平提高,且以IH1组变化最为明显;Hif-1α蛋白表达水平和p-NF-κB/NF-κB比值也随IH刺激时间延长而升高,以IH1组变化最为显著。以上结果提示,IH刺激可导致HT22细胞氧化应激损伤,其机制与Hif-1α表达上调以及NF-κB磷酸化水平提高有关,并且高频率的IH刺激对细胞损伤更为显著。