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家蚕滞育生物钟蛋白质Ease A4的纯化及其分子结构分析 总被引:2,自引:0,他引:2
EaseA4是家蚕卵的一种滞育生物钟蛋白质.产下后2d的家蚕C108品种滞育性卵,经过丙酮脱脂、85℃热处理、硫酸铵沉淀和SephadexG-25凝胶过滤层析初步分离,进一步经过Sep-PakC18脱盐浓缩,HPLC(柱为YMC-PackProtein-RP)分离,通过SDS-PAGE和MALDIMS方法鉴定,纯化得到EaseA4蛋白质.从10g蚕卵最终得到了11.8μgEaseA4.EaseA4由从His到Tyr的155个氨基酸残基构成,蛋白质部分的分子量为16601.其22位氨基酸残基Asn处有一个Asn-X-Thr糖基化场所,并有糖基结合在该部位,糖基的分子量约为760.EaseA4的61位和150位的两个Cys氨基酸残基之间存在二硫键.糖基和二硫键的存在不仅有利于酶蛋白的分离,还可能与酶活性有关 相似文献
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家蚕滞育性卵盐酸处理的靶物质 总被引:11,自引:1,他引:10
酯酶A4(EA4)是家蚕卵的滞育生物钟蛋白质。从家蚕C108品种产下后48 h的滞育性卵和盐酸活化处理卵分离纯化出EA4酶蛋白,使用合成的EA4活性多肽抑制因子PIN(氨基酸结构:SIFMTKQHSQ DDIIQHPLDY VEQQIHQQKQ KLQKQTLN),研究了PIN对EA4酶蛋白的作用机制。滞育性卵的EA4酶蛋白和PIN在25℃混合24h后,用矩阵辅助激光解吸离子质谱法,检测到了二者的结合体,该结合体在盐酸处理后消失;盐酸活化处理蚕卵的EA4酶蛋白和合成PIN之间没有出现这种结合体。体外25℃,滞育性蚕卵EA4的ATPase特征性活性峰在6.5 h后出现,而盐酸活化处理蚕卵的EA4在1.5 h后出现活性峰值。盐酸处理可能通过解除PIN对EA4的抑制作用,在短时间内激活EA4酶蛋白,从而活化滞育性蚕卵。 相似文献
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