IGF-1抑制妊娠合并糖尿病诱导的鼠胚胎细胞凋亡

应用IGF-1拮抗高糖毒性环境胚胎细胞的凋亡、有利于早期胚胎的生长发育,为IGF-1在妊娠合并糖尿病的患者中的临床应用提供了依据。本实验构建妊娠合并糖尿病的昆明小鼠动物模型,检测不同浓度葡萄糖对体外培养胚泡细胞生长的影响。观察不同浓度胰岛素样生长因子-1（Insulin-like growth factor-1,IGF-1）对体外高糖环境胚泡细胞发育的影响,     

高浓度葡萄糖对昆明小鼠早期胚胎发育的影响

建立昆明小鼠受孕模型,分离并体外培养胚胎细胞.检测了各培养浓度下的细胞增殖、分化与凋亡.胚胎细胞在0.2mmol/L和5.56mmol/L葡萄糖浓度的KSOM培养基中能正常发育和孵化;而在浓度为15.56mmol/L和25.56mmol/L葡萄糖培养基中胚胎发育和孵化均受到损害(P<0.005),且总细胞数和内细胞团细胞数也明显减少(P<0.01),但其细胞凋亡率与0.2mmol/L和5.56mmol/L葡萄糖浓度下胚胎细胞凋亡率无显著性差异(P>0.05).随着葡萄糖浓度的增高,胚泡总的表面积无明显变化,但胚胎细胞密度呈增加趋势.高血糖对早期胚胎的发育具有毒性作用,提示高糖可能导致妊娠合并糖尿病患者的流产和胎儿畸形率升高.     

IGF-1抑制妊娠合并糖尿病诱导的鼠胚胎细胞凋亡

为研究妊娠合并糖尿病对孕妇及胎儿产生危害的机制,构建妊娠合并糖尿病的昆明小鼠动物模型,检测不同浓度葡萄糖对体外培养胚泡细胞生长的影响．观察不同浓度胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1, IGF-1)对体外高糖环境胚泡细胞发育的影响,利用细胞核DNA双染实验观察不同浓度IGF-1作用下胚泡细胞的凋亡．采用实时定量PCR(RT-PCR)分析不同凋亡相关基因在体外培养胚泡中的表达情况．结果显示,随着葡萄糖浓度的增加,胚泡细胞总数减少,高浓度葡萄糖(≥30 mmol/L)则能显著性抑制胚泡细胞的生长(P < 0.01)．RT-PCR检测发现妊娠合并糖尿病小鼠的胚泡igf-1表达下调,且与葡萄糖的浓度成正相关．凋亡相关基因bcl-2和bcl-xl的表达随着体外IGF-1培养浓度的增加而表达上调,而p53基因和凋亡相关基因Bax的表达则下调．细胞凋亡实验显示,随着IGF-1浓度的增加,体外培养胚泡细胞的凋亡逐渐降低,当IGF-1浓度达到100 μg/L时,几乎未发现细胞凋亡．因此,高血糖能抑制胚泡细胞的生长发育,导致igf-1的表达下调,而IGF-1能抑制胚泡细胞的凋亡,有利于胚泡细胞的生长发育．