重组人S100A6促进人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和迁移侵袭并抑制其凋亡

该研究旨在探讨重组人S100A6蛋白对乳腺癌细胞株MCF-7的增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。利用原核表达制备重组人S100A6蛋白(GST-hS100A6),SDS-PAGE显示其大小为36 kDa,Western blot显示其可以被S100A6抗体特异识别,BCA法测定1 L菌液共收获约16.7 mg蛋白;将其作用于人乳腺癌细胞MCF-7,MTT显示细胞培养48 h时,浓度为100μg/mL和300μg/mL的GST-hS100A6组的D_(492)值较GST组增加29.1%和84.6%(P<0.05),提示S100A6促进MCF-7细胞增殖;平板克隆形成实验显示GST-hS100A6组的克隆形成率较GST组高38.7%(P<0.05),提示S100A6促进MCF-7的克隆形成;Hoechst染色显示GST-hS100A6组在24 h时细胞凋亡率较GST组减少67.8%(P<0.05),48 h时细胞凋亡率较GST组减少58.4%(P<0.05),提示S100A6抑制MCF-7细胞凋亡;划痕实验显示在24 h时GST-hS100A6组的划痕愈合率为GST组的2.2倍(P<0.05),提示S100A6促...     

重组hS100A6蛋白的原核表达及其对人骨肉瘤细胞系143B的生物学作用

目的:制备重组hS100A6蛋白,并研究其对人骨肉瘤细胞系143B的生物学作用。方法:构建pGST-HRV3C-hS100A6质粒,经转化至E.coli BL21,IPTG诱导表达融合蛋白GST-HRV3C-hS100A6,经超声破菌,谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠纯化,GST-HRV3C酶切,再纯化,Western blot鉴定,分光光度法蛋白定量。以人骨肉瘤细胞系143B为研究对象,MTT检测细胞增殖,Hoechst检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测hS100A6对β-catenin表达的影响。结果:成功制备重组hS100A6蛋白,测得该蛋白产量约为4mg/L菌液。30μg/ml重组hS100A6促进143B细胞的增殖、迁移、侵袭以及β-catenin的表达(P0.05),对143B细胞的凋亡无明显影响(P0.05)。结论:成功制备重组hS100A6蛋白,30μg/ml重组hS100A6蛋白对143B细胞有一定的促进作用。     

S100A6蛋白对细胞中β-catenin水平的影响及可能机制

探讨S100A6蛋白对细胞中β-catenin水平的影响及可能机制。用表达S100A6及其siRNA的重组腺病毒AdS100A6和AdsiS100A6处理人骨肉瘤细胞系143B,Western blot分析处理前后细胞中β-catenin水平的变化;再以人胚肾细胞HEK293为研究对象,通过免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)联合Western blot检测S100A6与Wnt经典信号通路主要成员β-catenin、糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)、散乱蛋白(Dishevelled,DVL)和轴蛋白(Axin)之间的相互作用。结果:1)AdS100A6作用48h后,143B细胞中β-catenin水平较实验对照组(AdGFP组)增加了64%(P<0.01),而AdsiS100A6处理的细胞中β-catenin较AdGFP组减少了20.2%(P<0.05),AdGFP组与空白组之间的差异无统计学意义;2)在S100A6抗体的沉淀物中,检测到β-catenin、GSK-3β和DVL,而无Axin检出;3)β-catenin、GSK-3β和DVL的抗体沉淀物中,均有S100A6检出,而Axin抗体的沉淀物中无S100A6检出。结论:S100A6能够上调人骨肉瘤细胞系143B中的β-catenin水平;并与β-catenin、GSK-3β和DVL之间存在直接相互作用;S100A6与这三个分子之间的直接相互作用可能抑制了β-catenin的降解,使之在胞浆内聚集,水平升高。这可能是S100A6上调β-catenin的部分机制。     

hS100A6对人骨肉瘤细胞株143B的体内体外作用

为研究hS100A6对人骨肉瘤细胞系143B的体内体外作用,利用整合有S100A6基因和SiS100A6基因的腺病毒(AdS100A6和AdSiS100A6)作用于143B细胞,MTT法和台盼蓝染色法检测其对细胞的增殖作用,Hoechst染色法检测其对凋亡的作用,Transwell实验检测其对迁移的作用,同时以143B裸鼠皮下移植瘤为动物模型,检测S100A6对143B的体内作用,结果显示AdS100A6干预后出现细胞增殖活性的减弱、凋亡率增高、迁移率降低,在体内试验中瘤体体积明显较对照组减小,而AdsiS100A6干预后出现时间依赖性地细胞增殖活性的增强、凋亡率降低、迁移率增高,体内试验中瘤体体积较对照组明显增大.提示hS100A6能抑制人骨肉瘤细胞株143B细胞的增殖和迁移,并促进细胞凋亡,同时能抑制人骨肉瘤细胞株143B的裸鼠皮下移植瘤的生长.