敲低PFKP联合肉碱棕榈酰基转移酶抑制剂etomoxir协同对肾透明细胞癌细胞Caki-1的抗肿瘤作用

目的:研究敲低P型磷酸果糖激酶(phosphofructokinase,PFKP)联合肉碱棕榈酰基转移酶抑制剂etomoxir对肾透明细胞癌Caki-1细胞的影响,并进一步探究其作用机制。方法:利用Western blot验证对照及PFKP shRNA敲低肾透明细胞癌细胞中PFKP的敲低效率,分别检测对照组(shCtrl)、PFKP敲低组、etomoxir组(shCtrl+etomoxir)、PFKP敲低联合etomoxir组的增殖曲线。使用Annexin-V/PI染色并用流式细胞检测对照组、PFKP敲低组、etomoxir组、PFKP敲低联合etomoxir组的细胞死亡,研究PFKP敲低联合etomoxir对细胞存活的影响。分别检测对照组、PFKP敲低组、etomoxir组、PFKP敲低联合etomoxir组的ATP水平与脂肪酸变化。结果:Western blot结果验证了PFKP的敲低效率。流式细胞检测显示,对照组、PFKP敲低组、etomoxir组、PFKP敲低联合etomoxir组的平均细胞死亡率分别为1.1、1.9、13.9、31.3%。PFKP敲低联合etomoxir组Caki-1细胞的死亡率显著高于单纯PFKP敲低与etomoxir组(P0.05)。PFKP敲低联合etomoxir组Caki-1细胞的ATP水平显著低于单纯PFKP敲低与etomoxir组(P0.05)。Etomoxir的加入抑制了PFKP敲低引起的游离脂肪酸下降(P0.05)。结论:PFKP敲低联合etomoxir对Caki-1细胞呈现协同的细胞毒抗肿瘤作用。     

上尿路腔内手术中降低肾盂压力机制与方法的研究进展

1983年,Wickham教授首先提出微创外科(minimally invasive surgery),此后,微创泌尿外科逐渐成外具有科学意义上的微创外科学的一个重要的分支学科。上尿路的腔内手术,包括PNL(Percutaneous nephrolithotomy)、URS(Ureteroscopic)、f-URS(Flexible ureteroscope)等。与传统手术相比,上尿路的腔内手术具有创伤小、时间短、恢复快、并发症少,并且可以直视下进行手术操作,临床应用较广泛。在腔内操作时,为保证术中手术视野的清晰度,手术多采用生理盐水(NS)进行灌注,进而导致肾盂压力升高,引起各项潜在的危害。因此如何在上尿路腔内手术中降低肾盂压力成为一个研究的热点。近些年,腔内器械的改进,包括镜体灌注通道入路与出路的分开设计、回流鞘的设计、压力泵的改进,在一定程度上降低了肾盂压力。灌注液体中加入相应浓度的药物,抑制上尿路平滑肌的蠕动与收缩,也在一定程度上降低了肾盂压力。本文介绍了上尿路腔内手术中肾盂压力的影响因素,回顾了肾盂压力升高后的危害,分析了肾盂压力升高机制,总结了肾盂压力降低的各种方案以及将来的应用前景。     

miR-203下调TLR4-Myd88-NF-κB信号通路诱导M2型巨噬细胞极化

目的:验证miR-203通过与TLR4 mRNA的3'-UTR特异性结合下调TLR4-Myd88-NF-κB信号通路诱导M2型巨噬细胞极化。方法:通过miRanda软件预测TLR4 mRNA 3'-UTR存在mi R-203结合位点。根据TLR4 mRNA 3'-UTR序列设计目的基因片段以及突变型目的基因片段,以pmirGLO为载体构建双荧光素酶报告基因野生型载体(pmirGLO-TLR4 3'-UTR)及其突变型载体(pmirGLO-mut-TLR4 3'-UTR)。将293T细胞共转染pmirGLO-TLR4 3'-UTR质粒或pmirGLO-mut-TLR4 3'-UTR质粒及mmu-mi R-203-3p mimics或mimic NC,通过双荧光素酶报告基因系统验证mi R-203可以与TLR4 m RNA的3'-UTR特异性结合,通过Real-time PCR及Western blot验证小鼠巨噬细胞RAW264.7转染了mmu-miR-203-3p mimics、mimic NC后,M1型巨噬细胞markers (i NOS, TNF-α, CCL-3, IL-23),M2型巨噬细胞markers (Arg-1, CX3CR1, IL-4, MRC, IL-10, Ym-1)及TLR4-Myd88-NF-κB信号通路的表达。使用TLR4抑制剂TAK-242抑制小鼠巨噬细胞TLR4-Myd88-NF-κB信号通路后,转染mmu-miR-203-3p mimics、mimic NC,再次检测M1,M2型巨噬细胞markers及TLR4-Myd88-NF-κB信号通路的表达。结果:双荧光素酶报告基因系统显示293T细胞转染了pmirGLO-TLR4 3'-UTR质粒及mmu-miR-203-3p mimics后,其相对荧光素酶活性△CT较转染了pmirGLO-mut-TLR4 3'-UTR质粒或者mimic NC均有显著降低,其差异达到统计学意义(P0.05)。Real-time PCR及Western blot显示转染了mmu-miR-203-3p mimics的小鼠巨噬细胞M1型巨噬细胞markers (i NOS, TNF-α, CCL-3, IL-23)表达减少,M2型巨噬细胞markers (Arg-1, CX3CR1, IL-4, MRC, IL-10, Ym-1)表达增加,同时伴有TLR4-Myd88-NF-κB信号通路表达下调,而通过给予TAK-242抑制了mmu-miR-203-3p mimics下调TLR4-Myd88-NF-κB信号通路及诱导M2型巨噬细胞极化的作用。结论:mi R-203与TLR4 m RNA的3'-UTR特异性结合下调TLR4-Myd88-NF-κB信号通路诱导M2型巨噬细胞极化。     

糖尿病大鼠膀胱和骶髓背根神经节中NGF的表达与尿流动力学改变的研究

目的：探讨糖尿病大鼠膀胱与骶髓背根神经节（DRG）中神经生长因子（NGF）的表达与尿流动力学改变。方法：建立糖尿病大鼠模型10只,对照组10只,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）法,分别检测大鼠膀胱组织及骶髓DRG中NGF的变化情况,结合代谢笼及尿流动力学改变,探讨糖尿病膀胱病变的可能发病机制。结果：造模12周后,糖尿病大鼠膀胱容量较正常对照组明显增大（1.47±0.28vs0.71±0.12,p〈0.05）,残余尿量明显增多（0.52±0.18vs0.07±0.08,p〈0.01）,排尿效率明显下降,膀胱及骶髓DRG中NGF表达水平明显降低。结论：NGF在糖尿病大鼠膀胱和骶髓背根神经节中低表达,在糖尿病膀胱病变中发挥着重要作用。     

低温胁迫时间对4种幼苗生理生化及光合特性的影响

以盐肤木(Rhus chinensis)、假连翘(Duranta repens)、老鸭嘴(Thunbergia erecta)和葛藤(Pueraria lobata)4种幼苗为试验材料,研究了人工模拟下的低温胁迫环境(6℃)对幼苗叶片生理生化及光合特性的影响.结果表明:(1)随低温胁迫的延长,假连翘幼苗的叶绿素含量先升后降,其余3种幼苗持续下降,低温解除后均显著回升;4种幼苗的脯氨酸含量持续上升或波动;葛藤幼苗的可溶性蛋白质含量先升后降,其余幼苗显著上升,且低温解除后有所增加;4种幼苗叶片可溶性糖含量以及丙二醛含量呈增加趋势,SOD活性持续上升或先升后降.低温解除后,盐肤木幼苗的SOD活性略有上升,其余幼苗显著下降.(2)随低温胁迫的延长,4种幼苗的净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、蒸腾速率(Tr)均持续下降,假连翘的胞间CO2浓度(Ci)持续上升,其余幼苗先降后升.低温解除后4种幼苗叶片Pn、G、Tr均有不同程度的回升,Ci有不同程度的下降.低温胁迫和恢复48 h期间,4种幼苗的脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白质含量的增加和SOD活性的稳定或增加,减轻了幼苗叶片细胞的膜脂过氧化程度,维持了细胞膜的完整性,是幼苗对低温胁迫适应性反应的重要调节机制.恢复48 h时的Pn、Gs和Tr均有不同程度的回升,Ci有不同程度的下降,说明4种幼苗有一定的抗寒能力.(3)用主成分分析法分别对生理生化指标和光合生理指标进行分析,均得出4种幼苗的抗寒性顺序为葛藤＞盐肤木＞老鸭嘴＞假连翘,这一结果可为采矿石废弃地生态恢复的植物筛选提供科学依据.     

嵌合分子(DHT-PROTAC)在前列腺癌研究中的进展

前列腺癌多发于老年男性,已成为老年男性常见肿瘤之一。内分泌治疗目前是晚期前列腺癌主要治疗方法,但仍避免不了前列腺癌最终进展成激素非依赖性前列腺癌,导致内分泌治疗的失败。当前,对前列腺癌细胞株的AR表达的研究,主要集中在DNA水平及mRNA水平,而对AR蛋白翻译后调控的研究较少。近些年来,嵌合分子(DHT-PROTAC)是基于蛋白水平,调控AR蛋白的表达,成为研究前列腺癌转归新的热点。DHT-PROTAC是一种新型人工合成的异型双功能小分子;这种小分子是DHT与泛素连接酶E3识别基团的嵌合体,它不仅能与AR结合,而且能在结合后,诱导AR的泛素化,从而通过泛素-蛋白酶途径降解AR;本文介绍了嵌合分子的作用原理,回顾了近些年前列腺癌的治疗进展,分析了嵌合分子将来在前列腺癌治疗中的应用前景。     

应用管路封堵器处理输尿管上段结石的随机对照研究

目的:研究辅助使用管路封堵器后,采用输尿管镜下碎石术处理输尿管上段结石的效果及安全性。方法:选取自2012年6月至2013年2月需输尿管镜处理输尿管上段结石的病例198例,随机分为应用管路封堵器组98例和对照组100例。封堵器组术中输尿管镜发现结石后,封堵器组患者使用英诺伟IVX-SC10型管路封堵器超越结石远端封堵结石,再予钬激光碎石,对照组术中输尿管镜发现结石后,直接予钬激光碎石,术后留置双J管2至4周。记录并随访患者输尿管镜术后结石清除率及肾脏出血相关并发症。结果:管路封堵器组碎石成功率95.9%(94/98),对照组碎石成功率81.0%(81/100),两组有统计学差异(P=0.0011)。碎石成功后管路封堵器组出现3例(3.2%)肾脏破裂出血,而对照组无肾脏破裂出血,两组无统计学差异(P=0.1048)。结论:辅助应用管路封堵器能提高输尿管镜对于输尿管上段结石的碎石成功率;其使用并没有增加术后肾脏出血并发症的发生。     

5种绿化树种幼苗对干旱胁迫和复水的生理响应

以黄金叶(Duranta repens cv.’Dwarf Yellow’),葛藤(Pueraria lobata),老鸭嘴(Thunbergia erecta),假连翘(Duranta repens),山毛豆(Tephrosia candida)5种幼苗为试验材料,研究了人工模拟干旱胁迫环境对幼苗叶片生理指标的影响,结果表明干旱胁迫期间,5种幼苗的叶片含水量下降,5种幼苗叶片的叶绿素、脯氨酸、可溶性糖、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性逐渐增加,假连翘幼苗的叶片蛋白质含量小幅波动,其余幼苗持续上升。复水后幼苗的各项生理指标通常恢复到对照水平。主成分分析结果表明,5种幼苗的抗旱性为山毛豆>假连翘>老鸭嘴>黄金叶>葛藤。     

干旱胁迫下4种常用植物幼苗的光合和荧光特性综合评价

老鸭嘴,山毛豆,假连翘和葛藤是常见的矿山植被恢复植物。采用盆栽控制土壤水分的方法,测定了这 4 种幼苗叶片的光合和荧光指标,以期为矿山植被的恢复植物筛选提供依据。结果表明（1）干旱胁迫处理期间,4 种幼苗叶片的净光合速率（P_n）、气孔导度（G_s）、蒸腾速率（T_r）和胞间CO₂ 浓度（C_i）持续下降,复水8 d后P_n均显著增加,老鸭嘴和山毛豆的G_s和T_r恢复到对照水平,山毛豆和葛藤的C_i恢复到对照水平;假连翘幼苗叶片的气孔限制值（L_s）随干旱胁迫时间的延长而逐渐增加,其他3 种幼苗略降后增加,复水8 d后均恢复到对照水平。（2）干旱胁迫处理期间,4 种幼苗叶片的photosystemⅡ（PSⅡ）光能捕获效率（F_v’/F_m’）、实际光化学量子效率（Yield）和表观电子传递速率（ETR）持续降低,8 d时显著小于对照。复水8 d后,F_v’/F_m’小幅波动,Yield和ETR有所恢复,其中葛藤的Yield和山毛豆的ETR恢复到对照水平;4种幼苗叶片的非化学淬灭（NPQ）持续上升,在第8天显著大于对照,复水8 d后,均持续下降,其中葛藤恢复到对照水平。（3）对光合和荧光指标进行主成分分析表明,干旱胁迫下4 种幼苗的抗旱性能大小顺序为山毛豆 > 老鸭嘴 > 假连翘 > 葛藤。     

糖尿病大鼠膀胱和骶髓背根神经节中NGF 的表达与尿流动力学 改变的研究

目的:探讨糖尿病大鼠膀胱与骶髓背根神经节(DRG)中神经生长因子(NGF)的表达与尿流动力学改变。方法:建立糖尿病大鼠模型10只,对照组10只,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法,分别检测大鼠膀胱组织及骶髓DRG中NGF的变化情况,结合代谢笼及尿流动力学改变,探讨糖尿病膀胱病变的可能发病机制。结果:造模12周后,糖尿病大鼠膀胱容量较正常对照组明显增大(1.47±0.28vs0.71±0.12,p<0.05),残余尿量明显增多(0.52±0.18vs0.07±0.08,p<0.01),排尿效率明显下降,膀胱及骶髓DRG中NGF表达水平明显降低。结论:NGF在糖尿病大鼠膀胱和骶髓背根神经节中低表达,在糖尿病膀胱病变中发挥着重要作用。