超高效液相色谱-质谱联用法测定人尿液中5-羟吲哚乙酸浓度方法学验证

目的:采用超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS/MS)建立人尿液中5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)的检测方法。方法:采用人工尿液UR-N-CONTROL LEVEL 2 NP配制标准曲线,质控样品采用人工尿液和天然尿液配制而成,以5-HIAA的同位素氘标记物5-HIAA-d5为内标,尿液样品采用乙腈进行稀释处理后,采用UPLC-MS/MS检测。色谱柱为Waters HSS T3(100×2.1 mm,1.8μm),流动相A为含0.02%乙酸的2 m M醋酸铵水溶液,B相为:含0.02%乙酸的乙腈溶液,在2.5 min内使用5%的B相至100%的B相进行梯度洗脱,流速为0.5 m L/min,进样量3.0μL,柱温50℃;采用电喷雾负离子模式电离,5-HIAA和5-HIAA-d5内标的监测离子分别为m/z 190.1→146.2和m/z 195.1→151.0。结果:该方法测定的5-HIAA在0.0500至50.0μg/m L范围内线性良好,r≥0.9948,最低定量限(LLOQ)为0.0500μg/m L。5-HIAA批内、批间准确度在89.3%~99.8%之间,精密度(CV)≤8.4%。平均回收率为100.3%~102.3%。结论:该方法专属性强、灵敏度高,快速。人工尿液和天然尿液在定量分析时无差异,适合于人尿液中5-HIAA的浓度测定。