沙葱萤叶甲海藻糖磷酸酶基因GdTPP的克隆、原核表达及对温度胁迫的响应

【目的】海藻糖磷酸酶(Trealose-6-phosphate phosphatase,TPP)是参与昆虫海藻糖合成的关键酶之一。本研究旨在克隆和表达沙葱萤叶甲Galeruca daurica海藻糖磷酸酶基因,分析其对不同温度胁迫的响应,以期为进一步揭示其在沙葱萤叶甲生长发育及抗寒、耐热中的作用奠定基础。【方法】根据沙葱萤叶甲转录组数据,通过cDNA末端快速扩增(Rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆沙葱萤叶甲TPP的全长cDNA序列,并对该基因进行生物信息学分析;将该基因与pET28a载体链接构建表达载体,导入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)使其表达;利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测TPP基因在沙葱萤叶甲2龄幼虫不同温度下的表达格局。【结果】克隆获得1条沙葱萤叶甲TPP基因cDNA全长序列(GdTPP,GenBank登录号:MG431210),该基因全长1 372 bp,开放阅读框(ORF)864 bp,编码287个氨基酸;蛋白预测分子量为32.32 ku,等电点(pI)为6.19;无信号肽和跨膜结构;包含2个N-糖基化位点;蛋白质亚细胞定位预测该蛋白位于细胞质中。同源性分析表明,GdTPP与马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata TPP亲缘关系最近。成功构建原核表达载体pET28a-GdTPP,经IPTG诱导,GdTPP在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中高效表达。qPCR结果表明,低于25℃对照时,GdTPP表达量随着温度下降而上升,﹣10℃时达到最高值,为对照的1.82倍;高于25℃对照时,GdTPP表达量随着温度上升而上升,40℃时达到最高值,为对照的1.68倍。【结论】沙葱萤叶甲幼虫通过上调GdTPP的表达来应对高温和低温胁迫,该结果为进一步揭示TPP在昆虫应对温度胁迫过程中的作用奠定了基础。     

新生儿无乳链球菌分离株全基因组重测序分析

无乳链球菌是新生儿细菌感染的主要病原菌之一,严重危害新生儿的健康。目前,国内鲜有从基因组的角度对无乳链球菌进行深入研究。本研究对一株新生儿无乳链球菌分离株SA1507进行了全基因组重测序和生物信息学分析。与参考基因组进行比对,SA1507存在大量的变异位点,比对发现SNP 8 850个,大多数位于外显子区域;Indel 253个,大多数位于基因上游。对SNP和Indel进行COG聚类分析和KEGG通路分析,分别得到2 272个COG功能条目和1 363个KEGG通路条目。测序与分析将为进一步研究无乳链球菌的变异,感染和耐药性等奠定基础。     

胎盘Hofbauer细胞在HBV母婴垂直传播的作用

目的:探讨胎盘Hofbauer细胞在乙型肝炎病毒(HBV)母婴垂直传播的作用。方法:垂直传播组(母亲及其新生儿血HBsAg和HBV-DNA均为阳性)、非垂直传播组(母亲血HBsAg和HBV-DNA阳性而新生儿阴性)和对照组(母亲及其新生儿血HBsAg和HBV-DNA均为阴性)各30例,透射电了显微镜观察其胎盘Hofbauer细胞超微结构变化及其与HBV颗粒的关系。结果:①对照组未发现Hofbauer细胞:在垂直传播组和非垂直传播组,Hofbauer细胞散在分布于胎盘间质中。②在垂直感染组,Hofba-uer细胞肿胀,胞浆突起减少,胞浆空泡变大;粗面内质网及高尔基复合体萎缩,线粒体缩小,溶酶体少见;胞核增大,染色质浓缩、边聚。在非垂直感染组,Hofbauer细胞呈圆形或卵圆形,细胞表面有大量胞浆突起,排列着微吞饮小体,细胞胞浆内有圆形空泡;线粒体呈杆状,峭排列紧密,溶酶体较多,高尔基体及粗面内质网欠发达;胞核偏位,核仁显著,染色质分布均匀。③在Hofbauer细胞胞质空泡、细胞间隙内存在单个或多个成熟病毒颗粒、病毒包涵体和病毒抗原颗粒。结论:HBV可引起胎盘Hofbauer细胞超微结构改变,并经Hofbauer细胞介导引起母婴垂直传播。