剑叶龙血树内生放线菌活性菌株的筛选和鉴定

为筛选具有抗菌抗肿瘤活性的药用植物内生菌资源,该文对300余株分离自中国云南西双版纳及越南地区剑叶龙血树的内生放线菌采用琼脂块扩散法进行抗病原细菌活性筛选、平板对峙法进行抗真菌活性筛选、SRB法测定菌株的细胞毒活性及PCR扩增方法筛选非核糖体肽合成酶NRPS基因及聚酮合酶PKS-I、PKS-Ⅱ基因;对得到的优势菌株经8种培养基进行发酵,采用10种病原细菌、3种病原真菌及2种人肿瘤细胞株测试其发酵粗提物的抗菌及抗肿瘤活性以确定最佳发酵培养基;用16S rRNA基因测序方法初步鉴定5株优势菌株的分类地位。结果表明:初筛得到5株抗菌活性、体外细胞毒活性及NRPS、PKS相关基因表达阳性的菌株S01-S05,其中4株(S01-S04)属于链霉菌属、1株(S05)属于类诺卡氏菌属;菌株经不同培养基发酵后产物的抗菌和抗肿瘤活性不同,其中Streptomyces sp. S04在7种培养基中的发酵提取物对8种测试病原菌均有较强抑制作用,且该菌株用Medium C的发酵提取物对人肝癌Hep G2细胞株抑制率达到100%,为剑叶龙血树内生菌活性成分挖掘及新型抗菌药物筛选奠定了基础。     

剑叶龙血树内生真菌的分离及体外抑菌活性筛选

为研究剑叶龙血树内生真菌资源多样性,初步探讨和筛选具有抑菌活性的特异性菌株以及进一步开发剑叶龙血树内生真菌的抗菌活性化合物。该文采用植物组织分离法从剑叶龙血树茎和叶中分离内生真菌,对内生真菌进行液体发酵7 d,经乙酸乙酯萃取后制得粗提物,并采用牛津杯扩散法,以10种常见病原菌和5种临床耐药菌为靶标检测其发酵粗提物的抑菌活性,对有较好抑菌活性的内生真菌进行分子鉴定。结果表明:(1)从剑叶龙血树茎、叶中共分离得到345株内生真菌,294株对一种以上指示菌有抑制活性;(2)其中84株内生真菌对5株临床耐药菌均有不同程度的抑制活性,占所分离菌株总数的24.35%,75%的内生真菌对金黄色葡萄球菌有抑制活性。这说明剑叶龙血树中存在多种有抑菌活性的内生真菌,为剑叶龙血树内生菌抗菌活性成分挖掘及新型抗菌药物筛选奠定了基础。     

剑叶龙血树内生真菌Colletotrichum sp.B-152次生代谢产物研究CSCD

采用色谱技术和波谱学分析从剑叶龙血树内生真菌Colletotrichum sp.B-152的培养液和菌丝中,鉴定出了9个化合物:2-hydroxy-4-methyl-1-phenyl-3-pentanone(1)、4-methyl-1-phenyl-2,3-pentanediol(2)、胸腺嘧啶核苷(3)、腺嘌呤核苷(4)、(22 E,24 R)-ergosta-7,22-diene-3β,5α,6β-triol(5)、(4 E,8 E)-N-D-2′-hydroxypalmitoyl-1-O-β-D-glycopyranosyl-9-methyl-4,8-sphingadienine(6)、tuberosider(7)、(22 E,24 R)-5α,8α-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol(8)、十七烷酸(9),其中化合物1作为天然产物首次报道,化合物2~4、6、7、9首次从刺盘孢属Colletotrichum真菌中分离得到。采用滤纸片扩散法对单体化合物的抑菌活性进行测定,9个化合物对至少一种指示菌表现出不同程度的抑制作用,其中化合物7和8表现出较为广谱的抑菌活性。