人Mn-SOD cDNA的克隆及其在巴斯德毕赤酵母中的表达

以人肝细胞株(L02)总RNA为模板,用RT-PCR扩增出人锰超氧化物歧化酶(hMn-SOD)cDNA,将其插入含有AOX1基因启动子和α分泌信号肽序列的毕赤酵母表达载体pPIC9k,构建重组质粒pPIC9k-MnSOD,转化毕赤酵母GS115,筛选出整合了多拷贝hMn-SOD基因的Mut^ 表型菌株,摇瓶培养,0．5％甲醇诱导表达。SDS-PAGE分析显示,诱导4d的培养上清中hMn-SOD的表达量约为上清总蛋白的32％,酶比活可达247、7u／mg。hMn-SOD在巴斯德毕赤酵母中实现了分泌性表达。     

氧化修饰极低密度脂蛋白增强其致动脉粥样硬化作用

研究了氧化修饰极低密度脂蛋白（ｏｘ－ＶＬＤＬ）对小白鼠腹腔巨噬细胞内脂质堆积作用及其机制。经Ｃｕ~（２＋）修饰后ＶＬＤＬ的电泳迁移率及脂质过氧化物含量均显著增加。ｏｘ－ＶＬＤＬ更易导致小鼠腹腔巨噬细胞内脂质堆积。以相同浓度（３００μｇＴＧ／ｍＬ）或不同浓度（２００─５００μｇＴＧ／ｍＬ）的ｏｘ－ＶＬＤＬ及正常ＶＬＤＬ（ｎ－ＶＬＤＬ）与巨噬细胞温育２４ｈ,前者使巨噬细胞内ＴＧ堆积均比后者显著（Ｐ＜０．０１）。同时,随ｏｘ－ＶＬＤＬ的脂质过氧化物含量（ＴＢＡＲＳ水平）增加,巨噬细胞内ＴＧ含量的百分率相应增加。以５０μｇ蛋白／ｍＬ的ｎ－ＬＤＬ,ｏｘ－ＬＤＬ,ｎ－ＶＬＤＬ及ｏｘ－ＶＬＤＬ与巨噬细胞温育６０ｈ。细胞内ＣＥ堆积中氧化组均比正常组高（Ｐ＜０．０１）。巨噬细胞对~（１２５）Ｉ－ｎ－ＶＬＤＬ与~（１２５）Ｉ－ｏｘ－ＶＬＤＬ的结合、降曲线均有饱和趋势。两结合曲线无明显差异,但细胞对后者降解的量比前者多。结合的竞争实验表明,ｎ－ＶＬＤＬ能抑制大部分~（１２５）Ｉ－ｏｘ－ＶＬＤＬ与细胞结合,而Ａｃ－ＬＤＬ只能抑制小部分。结果表明ｏｘ－ＶＬＤＬ主要通过受体途径：大部分经过ｎ－ＶＬＤＬ受体,小部分经过清道夫受体被巨噬细胞摄