微丝的信号调控机制和体内功能

微丝是细胞骨架的主要成分之一,广泛存在于所有真核细胞中。微丝与其相关蛋白介导的信号通路几乎在所有的生物学事件中发挥重要作用,参与了细胞形态维持、细胞运动、信号转导等细胞基本生物学行为的调控。同时,微丝及其相关蛋白还在个体发育中扮演重要角色,其异常与疾病发生发展过程密切相关。该文就微丝相关蛋白、微丝相关信号通路、微丝功能及其与疾病相关的最新研究进展进行小结,并对微丝的未来研究方向进行了初步的探讨。     

重组Maxadilan的制备与鉴定

为利用基因工程技术获得重组Maxadilan(RMMAX), 根据Maxadilan的氨基酸序列, 设计并人工合成了在原核表达的基因。克隆到表达载体pKYB, 重组质粒pKYB-MAX转化表达宿主菌Escherichia coli strain ER2566, 构建表达工程菌。用诱导剂IPTG诱导由目的多肽、内含肽和几丁质结合域(Chitin binding domain, CBD)组成的“三元”融合蛋白表达; 用几丁质珠亲和层析纯化了裂解液中的融合蛋白, 用b-巯基乙醇切割融合蛋白, 获得目的蛋白。所得的多肽经激光飞行质谱测定分子量结果与理论值相符, 生物活性分析表明, 重组Maxadilan有显著的提升血糖的作用。     

重组血管活性肠肽的制备及鉴定

为利用基因工程技术获得重组血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP),根据大肠杆菌的密码偏好性,设计并人工合成编码28个氨基酸的VIP基因。克隆到表达载体PTWIN,构建重组质粒PTWIN-VIP,转化宿主菌E. coli Strain ER2566,构建表达工程菌。实现由重组VIP,内含肽与纤维素结合域（cellulose binding domain, CBD）组成的融合蛋白表达。融合蛋白经几丁质亲和层析纯化,通过改变温度和缓冲液PH值切割融合蛋白,获得目的多肽。所得的多肽经质谱测定分子量结果与理论值相符。生物活性分析表明,重组VIP能显著降低急性炎症小鼠血清中抵抗素的水平,发挥抗炎作用。重组VIP的制备及其抗炎活性的鉴定为其深入开发奠定了基础。     

新型抗2-型糖尿病基因重组RMBAY的克隆、表达及生产环节优化

利用基因重组方法构建RMBAY的原核表达载体pKY-BAY,并研究其生产的优化条件。选用大肠杆菌偏爱密码子,用PCR方法合成全长RMBAY多肽基因,并定向插入到高效表达载体pKYB-mcs中,用大肠杆菌ER2566进行表达,融合蛋白经Chitin-Beads柱纯化后,结合在柱上的融合蛋白用β-巯基乙醇诱导蛋白内含肽的N端自动切割,释放目的肽,目的肽由质谱鉴定。 实验结果表明：利用载体pKY-B在大肠杆菌ER2566中,RMBAY能够实现高效表达;在优化的生产条件下,RMBAY的产量可达到6.7mg/L发酵产物,纯度大于98%,质谱鉴定RMBAY的分子量为3.887kDa. 与理论值相符合。     

VPAC1激动剂的抗肥胖作用(英文)

VPAC1是垂体腺苷酸环化酶激活多肽（pituitary adenylate cyclase—activating polypeptide,PACAP）和血管活性肠肽（vasoactive intestinal polypeptide,VIP）的共同受体。VPAC1介导PACAP和VIP抑制食欲和抗炎的生物学功能。本研究体外实验表明,VPAC1在分化成熟的3T3-L1脂肪细胞中表达增高,并且VPAC1激动剂（10—1000nmol／L每1×10^6 cells）可诱导脂肪细胞脂解,因此我们预计VPAC1激动剂具有抗肥胖及肥胖综合征的作用。为研究VAPC1激动剂[Lys15,Arg16,Leu27]-VIP（1—7）GRF（8—27）对营养性肥胖及肥胖综合征的干预作用,本研究又设计了两组体内实验：（1）高脂喂养NIH雄性小鼠4周,同时腹腔注射VPAC1激动剂;以注射生理盐水作为对照;（2）高脂喂养NIH雄性小鼠5周,构建肥胖模型后,再腹腔注射VPAC1激动剂4周,同样以注射生理盐水作为对照。采集摄食、体重、体脂、血糖及血脂等指标。结果显示,VPAC1激动剂显著抑制摄食、抑制高脂饮食诱导的体重及体脂（附睾及背部）重量的增长,并有效改善高脂饮食诱导的高血糖及高血脂,提高机体的糖耐受。高剂量（每天50nmol／kg体重）VPAC1激动剂比低剂量（每天5nmol／kg体重）有更显著的抗肥胖作用,提示VPAC1激动剂的抗肥胖作用具有剂量依赖性。以上结果表明,VPAC1激动剂不仅能抑制高脂诱导的肥胖的发展,而且可有效改善肥胖相关疾病：其抗肥胖作用的机制是复杂整合的,值得进一步深入研究。