胰腺导管单克隆上皮样干细胞的蛋白表达特征

该文研究1例源于成年大鼠的胰腺导管单克隆上皮样干细胞系的蛋白表达特征、染色体核型及致瘤性。RPMI-1640有血清扩增培养源于成年大鼠的胰腺导管单克隆上皮样干细胞至单层,分别采用流式细胞术或免疫荧光反应检测干细胞蛋白水平的表达特征。常规法制备染色体标本,采用Adobe Photoshop CS6软件进行核型分析。将干细胞移植在裸鼠体内,观察其致瘤性。结果显示,该源于成年大鼠的胰腺导管单克隆上皮样干细胞在蛋白水平表达CK19、Neuro D2、Oct4、PCNA及Nanog,不表达Pdx1、Pax4、Pax6、Maf A、Ptf1a、Ngn3、nestin、Sox2、CD34、CD45、insulin、glucagon、ghrelin、somatostatin及secretin。细胞是正常的二倍体细胞(2n=42),无致瘤性。这表明,该源于成年大鼠的胰腺导管单克隆上皮样干细胞系共表达CK19、Neuro D2、Oct4、PCNA及Nanog蛋白。     

巴马香猪Toll样受体4基因cDNA的克隆及生物信息学分析

目的研究TLR4在猪自然免疫中的作用及机制,为抗病育种及免疫佐剂的开发提供依据。方法利用NCBI公布的TLR4基因序列设计引物,RT-PCR技术克隆巴马香猪TLR4基因。结果所得基因序列提交GenBank,登录号：GQ304754。经序列分析,发现巴马香猪TLR4基因开放阅读框长2526 bp,编码785个氨基酸,该蛋白等电点为6.58,分子量为96.4×103;与普通猪比对发现巴马香猪TLR4基因有5个碱基发生突变;与小鼠、狗、鸡、牛、羊和人的同源性分别为71.9%、81.5%、54.2%、86.4%、85.5%和81.9%;TLR4膜外区蛋白为背侧多个α螺旋和内侧多个β折叠平行交替排列构成一个弯曲状螺旋结构;N末端存在信号肽,且可能在23～24位氨基酸处存在裂解位点;胞外区有13个明显的LRR,分别位于第53～74、77～100、101～124、149～173、174～192、201～225、372～393、398～429、446～469、470～494、495～518、519～541、543～566位氨基酸区;膜外区含8个N连接的糖基化位点。结论本研究成功克隆巴马香猪TLR4基因,为进一步研究该基因的功能和蛋白质的特性奠定了基础。