Fd的制备及其参与的HPLC—荧光法检测PaO活力研究

PaO体外活力测定需要Fd作还原剂。通过丙酮沉淀法、DEAE柱层析等制备菠菜Fd,并将其应用于HPLC—荧光法研究PaO催化的Pheide α降解反应。结果表明：经DEAE柱层析纯化得到的是氧化型Fd,而未经DEAE柱层析得到的是还原型Fd,还原型Fd可以参与Pheide α降解反应,色谱峰面积可以表示PaO的活力;FCC的HPLC洗脱时间是5．1min,遮光条件下FCC的半衰期是34．66min,PaO在20℃催化Pheide α降解的活力较高。小麦幼苗离体暗诱导衰老过程中PaO活力变化幅度较大,暗处理5d其活力增加24．47倍,“PaO”Chl降解途径在麦类作物叶片衰老过程中普遍存在。     

小麦叶片磷酸酯酶生化特性的研究

采用分光光度法对小麦叶片磷酸酯酶的生化动力学特性进行了研究.实验结果表明:叶片磷酸酯酶水解pNPP的Km值为6.554 mm o l/L,Vm ax为0.774×103U/(m g prote in).该酶的最适pH为6.8,保温10 m in的最适温度为45℃,在50、60、70℃保温时,该酶活力丧失50%所需的时间分别为12、3.75和1.8 m in.不同的金属离子及络合剂对该酶活力有影响,M g2 和C a2 对该酶有激活作用,Zn2 、Cu2 和M n2 对酶活力则有不同程度的抑制作用.EDTA、磷酸氢二钠和偏钒酸铵对该酶活力也有抑制作用.利用L inew eaver-Burk作图法判定抑制类型分别为非竞争性、竞争性和非竞争性抑制,抑制常数分别为5.87、2.47和8.2μm o l/L.     

叶黄素循环组分的分离鉴定及紫黄质的大量制备

以薄层层析法(TLC)分离鉴定植物组织中叶黄素循环组分,建立了大量制备紫黄质的方法。此法所需时间短,分离效果好,检出灵敏度高,既适于少量样品的分离,也适于大样品的提纯制备,因此适合用于紫黄质的提取及大量制备。