两种高危型HPV假病毒的构建及其在血清中和抗体测定中的应用

目的 构建人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)16型(HPV16)和18型(HPV18)假病毒,探索优化假病毒制备的条件,并利用制备的假病毒评价HPV疫苗血清抗体的中和活性。方法 将优化后的HPV16和HPV18 L1、L2和EGFP基因片段分别插入pcDNA3.1+载体中,通过多质粒共转染293FT细胞制备假病毒。对转染试剂、多质粒共转染比例、转染时间和细胞裂解时间进行摸索优化,通过测定假病毒的滴度,确定假病毒制备的最佳条件。收获的假病毒用30%的碘克沙醇作为介质进行超速离心纯化,纯化后的假病毒用于电镜观察。利用假病毒中和试验对制备的原核表达复性蛋白HPV16 L1免疫血清以及HPV16和HPV18病毒样颗粒(virus-like particles, VLP)免疫血清进行中和活性评价。结果 成功构建了假病毒,并确定了假病毒制备的最佳条件:pL1∶pL2∶pEGFP等3种质粒共转染比例为1∶0.1∶0.5,总量为4μg;转染时间为72 h,细胞裂解时间为24 h时获得的假病毒滴度最高。透射电镜观察结果显示,HPV16和HPV18假病毒颗粒基本呈规则圆形,形态上与天然病毒颗粒相似。中和试验结果显示,当用原核表达复性蛋白HPV16 L1免疫血清中和HPV16假病毒时,并不能抑制假病毒的感染活性;但HPV16和18 VLP免疫血清能明显的抑制HPV16和HPV18假病毒的感染活性。结论 成功构建并制备了2种高危型HPV假病毒,并可用于中和试验评价HPV疫苗血清抗体的中和活性。     

假病毒的应用研究进展

利用野生型病毒株研究病毒的生物学特性及其与宿主细胞相互作用的机制是病毒学领域常用的研究方法,但前提条件是此类病毒能够在体外培养,且传染性和致病性低,对人身安全和环境不构成威胁。对于一些传染性强、致死率高,体外培养难以获得,且需在高级别生物安全实验室操作的病毒,如H7N9、H5N1、SARS和埃博拉病毒等,体外研究其生物学特性有较大的困难和局限性。因此,寻求一种替代真病毒的方法来研究特定病毒特性势在必行。体外构建假病毒由于具有生物安全性高、宿主嗜性广、稳定性强等优点,受到人们的关注,已广泛应用于疫苗研发、病毒与宿主细胞之间的相互作用、病毒敏感细胞的筛选、中和抗体和中和抗原表位研究等方面,这是一种非常安全有效的研究手段。现就此进行综述,并总结相关领域的研究进展。