油菜Bna miR1140基因的分离与转化及其过表达分析

为了探究油菜miR1140基因的功能,该研究利用PCR技术从油菜栽培种westar中克隆了miR1140前体基因,并与pPZP212载体连接,构建了miR1140前体基因的过表达载体,通过农杆菌介导法将其转化到甘蓝型油菜westar品种中。(1)PCR鉴定表明,共获得14株过表达Bna-miR1140基因油菜阳性株。(2)表型观察显示,阳性株的叶片形态、花器结构没有变异,株高、主花序长度、主花序结角数和千粒重均与对照相当,但其中有5株过表达Bna-miR1140基因油菜阳性株(T0代)出现双主序株型,且分枝部位较对照低,分枝数较对照明显增多,使全株有效角果数增多,单株生产力较对照提高26%,而其他9株阳性株均与野生型油菜表型一致。(3)T1代田间表型分析表明,5株过表达35S∷Bna-miR1140(T0代)的T1代转化株系全生育期较对照极显著延长9~14d,且5株T0代中有4株的株型变异符合3∶1的遗传分离规律。研究推测,油菜Bna-miR1140基因可能参与了调控油菜的分枝发育。     

油菜(Brassica napus)Bna-miR1140基因启动子miR1140Pro的克隆与表达模式研究北大核心CSCD

旨在研究Bna-miR1140的表达模式及其调控机理,依据本实验室前期的油菜miRNA芯片实验结果,从油菜栽培种Westar中克隆了Bna-miR1140前体序列上游1.5 kb的片段,并进行了顺式作用元件分析,然后构建了GUS报告基因植物表达载体,通过农杆菌介导法将miR1140 pro∷GUS转化到甘蓝型油菜Westar品种中,经PCR法鉴定获得5株阳性株。对阳性株油菜T1代各组织的GUS化学染色分析表明,miR1140前体序列上游1.5 kb区域具有启动子的功能,能够驱动GUS在油菜中表达,并且GUS基因仅在叶柄及叶腋中特异性表达,说明油菜miR1140Pro为特异性启动子。     

碱性果胶裂解酶摇瓶发酵条件的研究

利用碱性果胶裂解酶生产菌株Bacillus subtilis WSH02-02进行摇瓶发酵优化,确定了最适种子斜面培养基、种子摇瓶培养基和发酵摇瓶培养基等培养条件,经14h的摇瓶发酵,酶活最高达到8．29U／mL。     

油菜糖基转移酶BnIRX14基因家族鉴定及遗传转化

糖基转移酶在植物抗逆和发育调控中发挥着重要作用，为发掘糖基转移酶BnIRX14基因家族成员，解析在甘蓝型油菜中的生物学功能，该研究利用前期在甘蓝型油菜中克隆到的BnIRX14基因，采用序列比对和遗传转化的方法，进行BnIRX14基因家族成员鉴定和功能验证，以探讨BnIRX14基因家族在油菜发育中调控机理，为油菜杂交育种和抗逆育种提供理论依据。结果表明：(1)经基因组数据库比对分析在甘蓝型油菜中成功鉴定到3个糖基转移酶不同亚家族的11个BnIRX14家族成员，它们均具有糖基转移酶GT43家族成员结构域特征，其中有8个基因分别被定位在6条不同染色体上，3个亚家族在基因结构和保守元件中具有较大特异性。(2)利用农杆菌介导转化法，获得BnIRX14基因RNA干扰转基因油菜株系20株，经PCR检测，确定5株阳性转化体。(3)表型鉴定发现，有2株阳性转化株的花柱头至花柱中央为一孔状空腔，子房较野生型明显膨大，且柱头表面授粉后不能结实，表现雌性不育；其他3个阳性株花器结构发育正常，但植株茎、枝表皮有液体渗出，呈露珠状粘附在茎、枝表面。(4)实时荧光定量PCR分析显示，转BnIRX14基因油菜阳性植株...