采用液质联用方法检测黄秋葵荚果黄酮类物质含量

该研究为了培育兼抗4种病毒的马铃薯品种,采用RT￣PCR技术对PVX、PVS、PVY和PLRV的外壳蛋白( CP )基因进行克隆与分析,获得了大小分别为670、800、700、600 bp的CP基因序列,将获得的CP基因序列与NCBI中已报道的序列进行比对分析,其同源性都在96％以上。根据所克隆的CP 基因对靶标片段进行筛选,获得了大小约300 bp的靶标片段PVX￣rh、PVS￣rh、PVY￣rh和PLRV￣rh,同时利用 Overlap￣PCR技术将4种病毒的靶标片段进行拼接,得到了长度约为1200 bp的融合片段XSYV￣rh,与预期目标片段XSYV￣yxz的相似性达100％。利用DNA重组技术将融合片段XSYV￣rh克隆到pGM￣T载体上构建成克隆载体pGM￣T￣XSYV￣rh,用SpeⅠ和SacⅠ对克隆载体pGM￣T￣XSYV￣rh和植物表达载体pART27进行同步双酶切,用T4 DNA连接酶将XSYV￣rh片段连接到载体pART27上,成功构建了同时含4种病毒CP 基因片段的植物表达载体pART27￣XSYV￣rh。采用直接转化法将植物表达载体导入根癌农杆菌LBA4404中,并利用农杆菌介导法对烟草品种T12试管苗进行遗传转化,转化后的烟草植株经PCR检测,有40株转化植株可扩增出目的条带,表明XSYV￣rh融合基因已成功转入烟草基因组中。