猪CFL2b基因在成肌细胞中的表达及对肌球蛋白重链基因表达的影响

猪CFL2b基因主要在骨骼肌中表达,对肌肉的发育和肌纤维的形成具有一定作用。为了解猪CFL2b基因与肌纤维性状的相关性,利用定向克隆和基因转染技术获得能稳定表达猪CFL2b基因的成肌细胞株,荧光显微镜观察及Western Blotting检测CFL2b基因在成肌细胞中的表达;应用实时定量PCR技术对细胞内肌球蛋白重链基因（MyHC）的表达变化进行检测。结果显示：CFL2b基因对MyHC的表达有明显影响,其中MyHC2x基因和MyHC26基因的表达明显上调,MyHCl／slow的表达变化不明显。表明CFL2b基因与猪的肌纤维性状密切相关,推测猪CFL2b基因的高表达可能导致猪的不良肉质性状,可以考虑将CFL2b基因作为猪肉质性状的候选基因[动物学报54（6）：1014—1019,2008]。     

非折叠蛋白质应答对人胚肾细胞293A迁移特性的影响

为了研究非折叠蛋白质应答对器官发生的影响,应用衣霉素诱导非折叠蛋白质应答并观察其对人胚肾细胞系293A迁移特性的影响。在实验中,应用划痕法对细胞迁移进行观察,并应用细胞黏附实验、荧光染色技术、扫描电镜技术及免疫印迹实验分别对细胞黏附特性、微管及微丝、细胞表面边缘的突起及小分子GTPase的表达水平进行研究。结果表明,非折叠蛋白质应答可以抑制细胞迁移,进一步的研究发现,非折叠蛋白质应答可以降低细胞的黏附能力、引起细胞骨架的重排、抑制伪足的形成并降低RhoA的表达水平。这提示,非折叠蛋白质应答可能通过抑制应激细胞的迁移为应激细胞的功能修复赢得了时间,在器官发生过程中发挥作用。     

特异性下调葡萄糖调节蛋白78表达对肝细胞癌侵袭和转移能力的影响

为了研究特异性下调葡萄糖调节蛋白(Grp)78对肝细胞癌侵袭和转移能力的影响。通过小干扰RNA(siRNA)技术特异性下调人肝细胞癌细胞株BEL7402中Grp78的表达,并应用Transwell法和划痕法对肝细胞癌侵袭、转移能力的改变进行分析,应用免疫沉淀技术和GST-pulldown技术分别对黏着斑激酶(FAK)的磷酸化水平和小GTPase RhoA的活性进行研究,应用免疫印迹技术检测E-钙黏着蛋白、N-钙黏着蛋白和波形蛋白的表达。结果发现,Transwell实验和划痕实验结果显示特异性下调Grp78表达可以抑制肝细胞癌的侵袭和转移,免疫沉淀结果显示特异性下调Grp78表达可以降低FAK的磷酸化水平,GST-pulldown实验结果表明特异性下调Grp78表达可以上调RhoA的活性。免疫印迹实验结果表明特异性下调Grp78可以下调N-钙黏着蛋白、波形蛋白的表达,上调E-钙黏着蛋白的表达。结果表明特异性下调Grp78在体外可以抑制肝细胞癌的侵袭和转移,这种抑制作用是通过FAK脱磷酸化和抑制肿瘤的上皮-间叶转化实现的。     

P38和ERK1/2在肝细胞癌中的表达及意义

目的探讨p38（mitogen-activated protein kinase p38,p38）和细胞外信号调节激酶1/2（extracellular reg-ulated kinase 1/2,ERK1/2）在不同分化程度肝细胞癌（human hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达情况,以及两者的相关性。方法通过免疫组化（Envision）法,检测52例肝癌组织及l0例癌旁正常肝脏组织中p38和ERK1/2的表达。结果：p38和ERK1/2在肝癌组织中均有表达,与正常组比较差异有显著性,且阳性率的高低与其分化程度有关,p38在肝癌组织中的表达随分化程度的增高阳性率降低（P〈0.05）;ERK1/2在中、低分化的肝癌组织分别与高分化相比差异具有显著性（P〈0.05）。但低分化与中分化的肝癌组织比较虽也有差异但无统计学意义（P〉0.05）。癌组织中p38和ERK1/2的表达呈中度正相关（r=0.703,P〈0.05）。结论HCC中,p38和ERK1/2表达和活性增加,且存在一定的相关性。