建立人α突触核蛋白A30P突变的帕金森病大鼠模型

目的建立人α-突触核蛋白(α-synuclein,α-SYN)A30P突变型转基因大鼠的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型。方法利用慢病毒系统构建过表达野生型α-SYN载体pLKO-CMV-α-SYN-WT-P2A-GFP及α-SYN A30P突变载体pLKO-CMV-α-SYN-A30P-P2A-GFP,分别转染293FT细胞,瞬时转染24 h后WB检测α-SYN的表达水平。之后经慢病毒包装、浓缩,利用立体定位技术分别对大鼠中脑黑质致密部注射病毒稀释液,过表达α-SYN野生型和A30P突变型的慢病毒颗粒。免疫荧光染色检测α-SYN和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)的分布情况,并观察中脑黑质致密部多巴胺能神经元数量的变化。Rotating rod实验评价注射A30P慢病毒大鼠的行为改变情况。结果野生型和突变型A30P的基因表达载体在293FT细胞内能够高表达α-SYN蛋白。TH免疫荧光结果显示:与病毒稀释液组相比,过表达α-SYN野生型和A30P突变型大鼠均能导致中脑黑质致密部多巴胺能神经元数量的减少,而α-SYN A30P慢病毒注射组的中脑黑质神经元缺失的更多,具有显著性差异。对A30P转基因大鼠脑部神经元缺失部位进行免疫荧光发现,该区域TH染色几乎呈阴性,α-SYN蛋白出现大量聚集,该结果表明脑部神经元的消失同时伴随着α-SYN蛋白的聚集及TH表达的剧烈减少,进一步揭示过表达α-SYN A30P可以导致多巴胺能神经元数量的减少和退化。此外,rotating rod实验结果显示过表达α-SYN A30P大鼠表现出明显的进行性运动能力障碍。结论通过慢病毒系统建立了人α-SYN A30P突变型转基因大鼠的PD模型,为PD发病机制的研究及药物开发奠定基础。     

Ikaros通过靶向调控 c-KIT抑制B-ALL白血病细胞的增殖

Ikaros是一种重要的造血细胞分化与发育调控因子，其基因结构、蛋白质活性的改变与淋巴细胞白血病的发生密切相关。致癌基因c-KIT与白血病的发生有直接联系，但Ikaros与c-KIT之间的调控关系尚未见报道。本研究报道，在人急性B淋巴细胞白血病（B-acute lymphoblastic leukemia, B-ALL）细胞中，Ikaros可靶向调控c KIT基因的转录与蛋白质表达。通过在人B ALL细胞系Nalm6中分别高表达和shRNA干扰Ikaros后，qRT-PCR与 Western 印迹结果显示，Ikaros可直接抑制c-KIT基因的表达。双荧光素酶报告实验检测Ikaros及其突变体对c-KIT基因的直接靶向作用。结果显示，野生型Ikaros可明显抑制c-KIT的表达，而突变体则不能。进一步利用染色质免疫共沉淀技术（chromatin immunoprecipitation，ChIP），检测Ikaros对c-KIT上游启动子序列的结合活力。结果显示，Ikaros蛋白在c KIT的上游调控区约-500 bp处有明显的结合。Ikaros通过靶向c-KIT上游启动子，抑制c-KIT表达，抑制B-ALL细胞的增殖，为临床治疗白血病提供了新思路。     

血液灌流联合血液透析对维持性血液透析患者IL-6、TNF-alpha、hs-CRP及 Hcy等指标水平的影响

目的：研究血液灌流联合血液透析对接受维持性血液透析（MHD）的患者白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-alpha）、超敏C 反应蛋白（hs-CRP）及同型半胱氨酸（Hcy）等指标水平的影响。方法：选择2010年5 月至2013 年5 月在我院接受MHD的终末期 肾病112 例作为研究对象。根据数字法随机分成观察组及对照组,每组均含56 例患者。对照组行常规血液透析治疗,观察组行血 液灌流及血液透析的联合治疗。治疗12 周后对比分析两组治疗前后的各项炎性因子与营养学指标,及生活质量指数（QOL）评 分。结果：治疗后观察组的hs-CRP、IL-6 及TNF-alpha与Hcy水平均显著低于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。治疗后观察 组的血清Hb、TP及Alb 与TRF水平均显著高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。两组治疗后的QOL评分较治疗前均 显著上升,但观察组的上升幅度显著大于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论：血液灌流与血液透析联合治疗接受 MHD的患者,可有效改善患者机体的微炎症及营养状况,提升患者的生活质量,效果明显,值得临床推荐。     

油菜含油量相关基因Gpat、Lpat在不同肥密条件下表达规律研究

油菜是我国第一大自产油料作物,具有重要的食用、饲用等价值。提高油菜籽含油量一直是育种家们不懈追求的目标之一,不同的栽培措施对油菜含油量有较大影响,为了研究不同施肥量、种植密度对油菜中控制含油量相关基因Gpat、Lpat表达量的影响,本研究采用qRT-PCR测定不同时期、不同肥密条件下Gpat、Lpat基因的表达量,并对其表达情况进行了分析。研究得知:Gpat、Lpat表达量变化规律是相同的,即:随着氮肥的增加而降低,随着密度的增加而升高,随着硼肥的增加而先升高后下降。此外,本研究在A1B3C1、A1B2C2及A2B3C2处理下可同时促进Gpat与Lpat的表达,是比较理想的肥密条件,可为提高油菜的含油量提供参考。     

Ikaros通过靶向c-KIT抑制B-ALL白血病细胞的增殖

Ikaros是一种重要的造血细胞分化与发育调控因子,其基因结构、蛋白质活性的改变与淋巴细胞白血病的发生密切相关。致癌基因c-KIT与白血病的发生有直接联系,但Ikaros与c-KIT之间的调控关系尚未见报道。本研究报道,在人急性B淋巴细胞白血病(B-acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)细胞中,Ikaros可靶向调控c-KIT基因的转录与蛋白质表达。通过在人B-ALL细胞系Nalm6中分别高表达和shRNA干扰Ikaros后,qRT-PCR与Western印迹结果显示,Ikaros可直接抑制c-KIT基因的表达。双荧光素酶报告实验检测Ikaros及其突变体对c-KIT基因的直接靶向作用。结果显示,野生型Ikaros可明显抑制c-KIT的表达,而突变体则不能。进一步利用染色质免疫共沉淀技术(chromatin-immunoprecipitation,Ch IP),检测Ikaros对c-KIT上游启动子序列的结合活力。结果显示,Ikaros蛋白在c-KIT的上游调控区约-500 bp处有明显的结合。Ikaros通过靶向cKIT上游启动子,抑制c-KIT表达,抑制B-ALL细胞的增殖,为临床治疗白血病提供了新思路。     

纳米生物活性玻璃的制备及其对人成纤维细胞增殖性能的影响

该文采用溶胶–凝胶结合碱性共沉淀法和冷冻干燥技术制备纳米生物活性玻璃(NBG),通过SEM、TEM、激光粒度考察NBG的形貌、分散性和粒径,并通过四唑盐比色法(MTT)研究其浸提液对人成纤维细胞(HDF)增殖性能的影响。结果显示, NBG颗粒粒径小于50 nm,激光粒度仪检测到的平均粒径为491.8 nm,相比于溶胶–凝胶生物活性玻璃(SGBG), NBG平均粒径更小,分散性更好。NBG与SGBG浸提液在5倍、10倍和15倍稀释的浓度下均有利于HDF的增殖,但SGBG在早期稍有利于细胞增殖但作用不明显,而NBG则在后期对细胞增殖作用更显著,因此NBG在创面修复方面更具有应用前景。