慢性酒精中毒大鼠在学习记忆方面差异基因的生物信息学分析

借助基因芯片获取慢性酒精中毒大鼠海马相关基因的表达数据集,通过生物信息学的分析方法对差异表达基因进行筛选与分析。从分子水平揭示慢性酒精中毒对大鼠大脑海马体的影响,为慢性酒精中毒的损伤机制以及相关疾病发病机制的基础研究与临床治疗提供新的方向。同时,还通过Y迷宫实验对实验大鼠的学习记忆功能进行了检测,借助电镜拍摄其线粒体。结果显示,我们一共筛选出208个差异表达基因,其中51个表达上调,157个表达下调。其中涉及的主要信号通路有氧化磷酸化通路、D-谷氨酰胺和谷氨酸代谢通路、阿尔茨海默病信号通路、帕金森病信号通路、膀胱癌信号通路、B细胞受体信号通路和亨廷顿病信号通路等。由此我们得出结论,慢性酒精中毒可能影响了海马多个基因的表达,其中包括Rpsa、Wdr31、Rps11、Rps9、Ndufa2、Mrto4、Rpl6、Dap3、Ndufb8、Ndufb6、Ephb2、Cox6c、Prkcd、Rela、Raf1、Ubd、Mrps28、Mrpl35等关键基因,进而损伤了电子传递链复合体Ⅰ,最终损伤线粒体,导致大鼠学习记忆能力的损伤。     

Beclin-1 shRNA对低氧诱导的SH-SY5Y细胞自噬的影响

目的：构建Beclin-1基因短发夹干扰RNA（shRNA）慢病毒载体,感染人SH-SY5Y细胞,观察沉默Beclin-1基因后低氧对SH-SY5Y细胞自噬的影响。方法：构建特异性靶向Beclin-1基因的shRNA慢病毒表达载体和阴性对照序列慢病毒载体;再将载体转染入SH-SY5Y细胞;RT-PCR检测Beclin-1的mRNA表达;Western blot检测Beclin-1蛋白表达;CCK-8法测定Beclin-1 shRNA对SH-SY5Y细胞活力的影响。再将空白对照、阴性对照、转染型三种细胞分别以21%常氧及5%低氧培养,Western blot检测各组细胞LC3蛋白表达;电镜观察自噬小体。结果：Beclin-1 shRNA能明显抑制SH-SY5Y细胞Beclin-1的mRNA及蛋白的表达;沉默Beclin-1基因后,Beclin-1 shRNA组细胞存活率与阴性对照组相比无差异;成功建立了稳定表达Beclin-1 shRNA的SH-SY5Y细胞。5%低氧处理后,与阴性对照组相比较,Beclin-1 shRNA组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值下调,细胞内自噬小体数量减少。结论：慢病毒介导的Beclin-1shRNA对SH-SY5Y细胞的活力无影响,但可以抑制低氧诱导的自噬。     

氨基羟乙酸对慢性酒精中毒大鼠学习记忆的影响及可能的机制

目的：探究氨基羟乙酸（AOAA）对慢性酒精中毒大鼠学习记忆能力及可能机制的影响。方法：将60只SD雄性大鼠随机均分为3组（n=20）：空白对照组、模型组和治疗组。模型组和治疗组饮含6%（v/v）酒精水溶液28 d。14 d后,治疗组连续14 d腹腔注射AOAA（5 mg/kg·d）注射液,其余两组注射等量生理盐水。实验结束前5 d连续进行5 d的水迷宫实验,实验结束取大鼠海马组织检测H₂S含量、线粒体ATP酶活性及5-HT受体蛋白的表达。结果：与空白对照组比较,模型组大鼠水迷宫实验的第2~4日潜伏期、第2~4日游泳距离、H₂S含量均升高,ATP酶活性和海马CA1、CA3区5-HT受体阳性表达明显下降（P<0.01）;与模型组比较,治疗组大鼠第2~4日潜伏期、第2~4日游泳距离、H₂S含量均下降,ATP酶活性和海马CA1、CA3区5-HT受体阳性表达显著升高（P< 0.01）。结论：AOAA能够减轻慢性酒精中毒大鼠的症状,可能与AOAA影响H₂S的含量、线粒体酶活性、5-HT受体的含量有关。