艾滋病治疗的研究进展

艾滋病治疗的研究进展童迎凯（北京师范大学生物学系四年级ｌ００８７５）艾滋病（ａｃｑｕｉｒｅｄｉｍｍｕｎｅｄｅｆｉｃｉｅｎｃｖｓｒｎｄｒｏｍｅ,ＡＩＤＳ）由于其危害性大,死亡率高,且又具有传染性,因此引起了全世界医学界的高度重视。近年来亚洲地区的感染人...     

佛波酯对CKI p15INK4B高表达的人黑色素瘤细胞生长及凋亡的影响

通过DNA体外重组和转染技术, 将已构建好的含有p15基因全长的质粒pXJ-41-p15转染p15缺失的人黑色素瘤细胞A375,经G418筛选出阳性单克隆,并经PCR、蛋白质印迹等检测,证明建立了p15稳定高表达的细胞模型.实验表明,经佛波酯(PMA)长期处理,实验组细胞中的p15表达水平进一步上升,同时观察到蛋白激酶C(PKC)活性下降,与对照组细胞相比p15高表达的细胞PKC活性及细胞生长均受到较强烈的抑制,并能引起约30%的实验组细胞发生凋亡.凋亡细胞中Caspase3 P20亚基的水平上升.结果表明,CKI p15与PKC信号系统在调节细胞增殖、凋亡的过程中具有一定的相关性,它们的协同作用可能启动了细胞中与Caspase相关的凋亡通路,使细胞发生凋亡.     

蛋白激酶A抑制剂对HeLa细胞S期进程的影响

以同步化的HeLa细胞为实验材料,研究了蛋白激酶A(PKA)抑制剂对HeLa细胞S期进程的影响及其作用的分子机理.通过TdR双阻断法,获得了同步化的S期细胞,3H-TdR掺入实验表明PKA抑制剂typeⅢ(80mg/L)明显提高了S期3H-TdR的掺入水平,提示了PKA在S期进程中起阻抑作用.进一步实验表明,在PKA抑制剂typeⅢ作用下胸苷激酶(TK)活性和PCNA蛋白水平均有所提高,同时明显促进了CyclinA蛋白的表达,并抑制了周期负调因子p21蛋白的水平,但对CDK2表达几乎无影响.结果表明,PKA可通过作用于PCNA和引擎分子CyclinA的水平和通过影响p21的表达负调于S期进程.这可能是PKA负调HeLa细胞S期进程的分子机理之一.     

蛋白激酶A抑制剂对HeLa细胞S期进程的影响

以同步化的HeLa细胞为实验材料, 研究了蛋白激酶A(PKA)抑制剂对HeLa细胞S期进程的影响及其作用的分子机理.通过TdR双阻断法, 获得了同步化的S期细胞, ³H-TdR掺入实验表明PKA抑制剂typeⅢ(80 mg/L)明显提高了S期³H-TdR的掺入水平, 提示了PKA在S期进程中起阻抑作用.进一步实验表明,在PKA抑制剂typeⅢ作用下胸苷激酶(TK)活性和PCNA蛋白水平均有所提高,同时明显促进了CyclinA蛋白的表达, 并抑制了周期负调因子p21蛋白的水平,但对CDK2表达几乎无影响.结果表明, PKA可通过作用于PCNA和引擎分子CyclinA的水平和通过影响p21的表达负调于S期进程. 这可能是PKA负调HeLa细胞S期进程的分子机理之一.     

CKIp15~(INK4B)高表达对人黑色素瘤细胞cyclinD1和c-myc表达的影响及生长特性的改变

通过 DNA体外重组和转染技术 ,将已构建好的含有 p1 5基因的质粒 p XJ- 41 - p1 5转染 p1 5缺失的人黑色素瘤细胞 A 375,经 G 41 8筛选出阳性单克隆 ,并经 PCR、Western等检测 ,证明建立了 p1 5稳定高表达的细胞模型 .生长曲线和 FCM实验表明 ,与对照组细胞相比 ,实验组细胞增殖能力减弱 ,G1期细胞增加 ,S期细胞减少 .同时 ,细胞血清依赖性有所恢复 ,在软琼脂的集落形成能力下降 ,显示出细胞部分恶性表型逆转 .进一步免疫印迹实验表明 ,癌基因 c- myc的蛋白表达水平明显下降 .Cyclin D1的表达受到抑制 ,而 CDK4的表达则基本不变 .以上结果显示出 ,p1 5基因高表达能够抑制人黑色素瘤细胞的增殖及部分恶性表型 ,负调细胞周期进程 ,而 c- Myc蛋白和 G1期引擎分子 Cyclin D1表达的被抑制可能是 p1 5负调细胞增殖的分子机理之一     

CKI p15INK4B高表达对人黑色素瘤细胞cyclinDl和c-myc表达的影响及生长特性的改变

通过 DNA体外重组和转染技术 ,将已构建好的含有 p1 5基因的质粒 p XJ- 41 - p1 5转染 p1 5缺失的人黑色素瘤细胞 A 375,经 G 41 8筛选出阳性单克隆 ,并经 PCR、Western等检测 ,证明建立了 p1 5稳定高表达的细胞模型 .生长曲线和 FCM实验表明 ,与对照组细胞相比 ,实验组细胞增殖能力减弱 ,G1期细胞增加 ,S期细胞减少 .同时 ,细胞血清依赖性有所恢复 ,在软琼脂的集落形成能力下降 ,显示出细胞部分恶性表型逆转 .进一步免疫印迹实验表明 ,癌基因 c- myc的蛋白表达水平明显下降 .Cyclin D1的表达受到抑制 ,而 CDK4的表达则基本不变 .以上结果显示出 ,p1 5基因高表达能够抑制人黑色素瘤细胞的增殖及部分恶性表型 ,负调细胞周期进程 ,而 c- Myc蛋白和 G1期引擎分子 Cyclin D1表达的被抑制可能是 p1 5负调细胞增殖的分子机理之一