肺癌组织和肿瘤细胞系中BRG1的表达分析

BRG1（brahma—related gene 1）是进化上高度保守的SWI／SNF染色质重塑复合物的成员之一．研究表明：BRG1具有抑瘤基因的特征,可能与肿瘤的发生发展有关．我们采用RT—PCR、Northern杂交和Western blotting证实：肺腺癌细胞系A549和鼻咽癌细胞系HNE2、HNE3、CNE1中无BRG1的表达,而肺鳞癌细胞系NCI-H520、永生化正常人支气管上皮细胞系HBE和鼻咽癌细胞系HONE1、HNE1、CNE2中有BRG1的表达．同时,通过RT—PCR检测10例肺癌组织标本．发现60％（6／10）的肺癌组织中日RGG1的mRNA水平明显下调,而配对正常肺组织中BRG1的mRNA表达未见改变．对29例肺癌组织和10例配对正常肺组织切片进行免疫组化染色,结果显示：肺癌组织中BRG1蛋白表达的阳性率为37．9％（11／29）,配对正常肺组织中BRG1蛋白表达的阳性率为90％（9／10）,两者的差异有显著性（P〈0．05）．这提示BRG1确实在肺癌组织及多种肿瘤细胞系中表达下调或缺失,在肺癌发病过程中可能起一定的作用．     

丙型肝炎病毒 NS3 蛋白促进人源肝细胞的增殖及其相关机制研究

丙型肝炎病毒 (HCV) NS3 蛋白与肝癌细胞 (HCC) 的发生密切相关,但其机制尚不清楚 . 既往体外研究极少采用 HCV 的自然宿主细胞———人肝细胞作为研究体系,故所获研究结果有待进一步探讨和证实 . 构建了表达 HCV NS3 蛋白的真核质粒,通过稳定转染人源永生化肝细胞系 QSG7701 ,建立了稳定表达 HCV NS3 蛋白的人源永生化肝细胞系 QSG7701/NS3 ,以此为实验平台,检测了细胞增殖的变化,丝裂原蛋白激酶 (MAPK) 通路激酶磷酸化水平的改变及转录因子 AP-1 、 NF-κB 和 STAT3 的活性变化 . 结果表明： HCV NS3 蛋白可促进人源永生化肝细胞 QSG7701 的增殖, HCV NS3 蛋白激活 ERKs/AP-1 可能是其促进细胞增殖的重要机制,并通过上调转录因子 NF-κB 和 STAT3 的活性,诱导宿主细胞急性炎症损伤 .     

丙型肝炎病毒NS3基因对人肝细胞生物学特性的影响

目的:建立稳定转染HCVNS3的人源肝细胞系,探讨HCVNS3对肝细胞生物学特性的影响。方法:通过脂质体将HCVNS3的真核表达质粒稳定转染至QSG7701细胞(pRcHCNS3/QSG细胞),PCR,WesternBlot,免疫组化检测基因的整合和表达;光学显微镜和电子显微镜观察转染前后细胞超微结构的改变;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率变化;生长曲线,软琼脂集落实验,成瘤性实验探讨HCVNS3对肝细胞增殖的影响。结果:HCVNS3基因在pRcHCNS3/QSG细胞中得到整合和表达,定位于细胞浆。形态学显示出增殖旺盛的的特点,流式细胞仪检测pRcHCNS3/QSG细胞G0/G1期细胞数目减少而S期细胞数目增加,生长曲线和软琼脂集落实验表明pRcHCNS3/QSG细胞倍增时间明显缩短,停泊非依赖性生长能力明显增强,并能接种裸鼠成瘤,免疫组化证实肿瘤组织有HCVNS3蛋白表达。电镜和流式细胞仪检测显示HCVNS3能促进pRcHCNS3/QSG细胞凋亡。但其促增殖速度远大于凋亡率,表现为pRcHCNS3/QSG细胞获得恶性表型和致瘤性。结论:HCVNS3能明显促进人肝细胞QSG7701恶性转化,pRcHCNS3/QSG细胞可作为研究HCVNS3致癌机理的细胞模型。     

深海来源低温诱导表达载体pSW4的构建及其应用

【目的】在深海来源穿梭载体p SW2的基础上构建低温诱导高效表达载体,为最终获得环境污染物高效降解菌提供基础和工具。【方法】通过最小化敲除实验确定载体必需基因,以绿色荧光蛋白GFP为报告基因检测载体的表达能力变化,进一步添加纯化标签、多克隆位点及替换启动子等改造获得低温诱导表达载体pSW4。【结果】敲除实验结果显示编码单链结合蛋白的基因fps B敲除后载体的表达效率显著提高。以GFP为报告基因检测发现,pSW4的表达效率较pSW2有显著提升(4°C条件下提高10.7倍)。以深海细菌Shewanella piezotolerans WP3为宿主菌,应用pSW4为表达载体表达深海细菌Shewanella psychrophila WP2的聚合酶亚基,检测显示其在Mg~(2+)条件下具有切割单链DNA的核酸酶活性,而在Mg~(2+)或Mn~(2+)条件下具有切割双链DNA的核酸酶活性。【结论】构建了低温诱导表达载体pSW4,并证实了其适用性,有助于今后构建环境修复菌及相关的应用性研究。