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目的:研究不同浓度的镍对体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的影响。方法:用两种镍化合物(NiCl2·6H2O、NiSO4·6H2O)分别制成含Ni(Ⅱ)浓度为1000、500、250、125、62.5μmol/L及31.25μmol/L的溶液,作用于体外培养的HUVEC细胞株,72h后MTT法测试细胞增殖活性,确定NiCl2·6H2O与NiSO4·6H2O的TC50,并分别以TC50的Ni(Ⅱ)作用培养的HUVEC细胞株,MTT法检测不同时间点(24h、48h、72h、96h、120h)的细胞相对增殖活性;2,4-二硝基苯肼法检测作用72h时培养上清液及细胞裂解液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,计算Ni(Ⅱ)化合物作用下细胞LDH的释放率,评价Ni(Ⅱ)对其影响;HE常规染色观察两种镍化合物作用72h后的细胞形态;AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:两种化合物作用HUVEC细胞TC50为125μmol/L,随着浓度的不断增加,细胞毒性增强;同一浓度的Ni(Ⅱ)对细胞活性的影响随着作用时间增加而增强;两种镍化合物对细胞LDH释放率的影响无明显差异(P>0.05);NiSO4·6...  相似文献   
2.
真核生物多头绒泡菌的原质团是研究细胞周期的好材料。但尚无合适的表达体系可供选择。本研究用多头绒泡菌ardC actin基因启动子和终止子分别替换哺乳动物细胞表达质粒pDsRed1-N1的CMVIE和SV40 polyA片段,构建了多头绒泡菌红色荧光蛋白(RFP)表达质粒pXM1;用PardC-MCS-DsRed1-TardC替换pTB38表达盒PardC-hph-TardC,构建了多头绒泡菌RFP表达质粒pXM2。将多头绒泡菌转录延伸因子类似蛋白(PELF1)基因与质粒pXM2重组,构建了PELF1红色荧光融合蛋白(PELF1-RFP)表达质粒pXM2-pelf1。通过荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜观察RFP表达发现,电转参数为4kV/cm(电场)、1A(电流)、70μs(电击时间)时,质粒pXM1和pXM2电转多头绒泡菌微原质团(≤500μm)后24~48h内,RFP荧光最显著;而PELF1-RFP则主要聚集在多头绒泡菌细胞核,说明本试验建立的表达系统可以用于研究特定蛋白在多头绒泡菌内的瞬时表达。  相似文献   
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