苏云金芽胞杆菌cyt2Ba16基因的克隆表达

[目的]获得苏云金芽胞杆菌QL32-1中杀虫晶体蛋白基因,并分析其杀虫活性。[方法]采用cyt基因通用引物、两步法染色体步移的方法对QL32-1中cyt基因进行鉴定和全长克隆,再构建重组质粒pET-28a-2Ba16,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,最后对表达蛋白进行杀虫活性分析。[结果]克隆得到1个全长783 bp cyt2B基因,其编码260个氨基酸,推导分子量约29.69 kDa,此氨基酸序列与已知的Cyt2Ba1蛋白同源性最高,为92.4%。该基因被国际杀虫晶体蛋白基因命名委员会正式命名为cyt2Ba16。杀虫活性分析表明:cyt2Ba16对双翅目的库蚊(Culex quinquefasciatus)具有显著的杀虫活性,LC50为9.73μg/mL。[结论]cyt2Ba16基因是一个对库蚊具有较高杀虫活性的新型cyt基因,为QL32-1菌株的应用提供理论基础。     

三株抗多重耐药性金黄色葡萄球菌的放线菌分离筛选与鉴定

为了筛选对人体常见病原菌具有显著抑菌活性的放线菌资源，本研究采用六种培养基（GA、CMKA、GW、MM、SCK、HV）对新疆乌鲁木齐南山地区土壤样本中放线菌资源进行分离、并选取8株临床标准致病菌株和1株分离自临床耐药金黄色葡萄球菌RS作为指示菌，通过平板对峙法进行抑菌活性放线菌的筛选，最后对具有显著抑菌活性的放线菌进行菌落形态观察和基于16S rRNA序列的系统进化树分析。在分离的109株放线菌中筛选得到3株（C2-4、D4-2和E1-2）均对多重耐药性金黄色葡萄球菌RS（对苯唑西林、四环素、红霉素及青霉素G均有耐药性）、表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）具有显著抑菌活性的放线菌菌株。系统进化树分析表明，放线菌C2-4和D4-2与拟无枝酸菌属（Amycolatopsis）放线菌亲缘关系最近，放线菌E1-2与链霉属（Streptomyces）放线菌进化关系较近。抑菌活性放线菌C2-4、D4-2和E1-2的鉴定，将为其活性次级代谢产物的分离奠定了基础。