微卫星座位对实验动物beagle犬的遗传分析

目的对美国进口、广州自养beagle犬基因组中存在的微卫星结构进行分析,研究其群体的微卫星多态性,以此探索在分子水平上对作为实验动物的beagle犬进行检测。方法通过微卫星分子标记技术进行遗传背景分析,并结合微卫星位点测序结果,研究DNA分子特征。结果在研究位点上共发现6个复等位基因,进口犬群体共有6个等位基因片段,自养犬群体共有5个等位基因片段,根据基因型计算各群体等位基因频率,由相关公式计算杂合度、群体多态信息含量(PIC)、基因纯合率、基因分化系数。结论两群体的杂合度、PIC值均较高(分别为0.7010、0.6747和0.7876、0.7515),基因分化系数很低(0.021),表明两群体没有形成明显的独立群。     

鹳形目12种鸟类核c-mos 基因和线粒体12S rRNA基因序列分析及其系统发生研究

鹳形目鸟类的传统分类一直存在分歧,而近期的分子系统学研究大多只用单个基因,其结论的可信度需要进一步验证.本文通过核c-mos基因和线粒体12S rRNA基因序列分别和合并分析,采用分子系统学方法探讨了鹳形目6科12种鸟类的系统发生关系.文中测出鹳形目鸟类6种核c-mos基因的片断序列,结合来自Genebank的其他种类的c-mos和12S rRNA基因序列,分别经Clustal W软件对位排列后,以原鸡为外类群用最大似然法、邻接法和最大简约法建立系统树.系统树分析表明, 鹳形目6科之间的系统发生关系总结为：（鹭科,（（鹮科,美洲鹫科）,（鹳科,（鲸头鹳科,锤头鹳科））））.鹭科7个属之间的系统发生关系总结为：（麻（开鸟）属（夜鹭属（池鹭属（苍鹭属（中白鹭属（白鹭属,大白鹭属））））））.分别基于两个单基因的系统树有一定差异,而基于合并数据的系统树支持率和分辨率都高于基于单基因的系统树,表明使用在遗传上相对独立的分子数据合并建立系统树有较高的可信度和分辨率,是一种更好的研究方法.     

牛血Cu/Zn-SOD的热稳定性

研究了不同的Cu^2 和Zn^2 浓度配比对SOD热稳定性的影响,并测定了SOD活性及利用考马斯亮蓝D250法测定蛋白质含量。结果表明在Cu^2 、Zn^2 分别为5．4mmol／1．和3．6mmol／L时SOD的活性最高,达到了92．6％;在75℃时大部分杂蛋白变性沉淀,SOD的比活力最高。最后确定在加入5．4mmol／L．Cu^2 ,3．6mmol／LZn^2 条件下,75℃下热变性,可以取得比较高活性和比活性的SOD。从而为寻找更简便、经济的提纯方法提供参考依据。     

金黄色葡萄球菌黏附素ClfA，FnBPA-A，FnBPA-BCD联合免疫的免疫生物学特性

摘要:【目的】为比较金黄色葡萄球菌黏附素分子聚集因子(ClfA)与纤连蛋白结合蛋白A(FnBPA)A区(FnBPA-A)及BCD区(FnBPA-BCD)的抗原性、抗体的黏附抑制特性及其免疫保护力。【方法】分别表达了ClfA蛋白、FnBPA-A和FnBPA-BCD蛋白,并将表达纯化后得到ClfA、FnBPA-A和FnBPA-BCD重组蛋白单独或联合免疫小鼠,收集免疫血清对其进行抗原性及免疫保护力的比较分析。【结果】结果显示,重组蛋白FnBPA-BCD对Fn的结合能力高于其对Fg的结合,而重组蛋白ClfA及FnBPA-A对Fg的结合能力高于FnBPA-BCD。血清抗体的检测结果表明,ClfA蛋白及FnBPA-A蛋白免疫组诱导抗体的水平均优于FnBPABCD组。3种蛋白联合免疫组的血清抗体效价及抗体抗黏附能力明显优于单一蛋白免疫组(P＜0.05)。3种蛋白联合免疫组与ClfA蛋白免疫组免疫保护率为100%,FnBPA-A组与FnBPA-BCD组免疫保护率分别为80%与50%。【结论】重组蛋白ClfA及FnBPA-A的免疫原性优于FnBPA-BCD,三者联合免疫较单一蛋白免疫在抗细菌的黏附、抗体诱导和免疫保护方面具有优势,提示这3种蛋白联合免疫有利于达到更好的免疫效果。     

信号肽序列对禽流感病毒H5N1 HA 蛋白GFP融合分子在真核细胞中表达的影响

[目的]构建绿色荧光蛋白(GFP)与禽流感病毒(AIV)HA基因的融合表达载体,观察信号肽序列的有无及位置对HA-GFP在293T细胞中的表达影响.[方法]应用PCR方法从H5N1亚型AIV质粒DNA中扩增出完整的或除去信号肽序列的HA基因片段,PCR产物经Xho Ⅰ和SmaⅠ双酶切后定向插入绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1的不同位点,将得到的重组体M1,M2和M3分别转化宿主菌DH5a,经双酶切及.DNA测序鉴定分析后,采用脂质体转染法将pEGFF-C1,M1,M2和M3转染人胚肾细胞系293T细胞,荧光显微镜下观察HA-GFP的表达,流式细胞仪检测表达HA蛋白的细胞百分数.[结果]经酶切及测序鉴定成功构建了HA-GFP重组表达载体M1,M2和M3,荧光显微镜及流式细胞仪检测到重组质粒转染的293T细胞表达强的荧光蛋白,信号肽的有无对HA-GFP融合蛋白在293T细胞中的表达有显著影响,信号肽序列使HA-GFP融合蛋白在293T细胞中的表达减少,而信号肽的位置对融合蛋白表达量的影响不显著.[结论]信号肽的有无对HA-GFP融合蛋白在细胞中的表达有显著影响.