氨苄青霉素人工抗原的制备及抗体特性鉴定

根据氨苄青霉素(AMP)分子结构上存在的化学活性基团羧基,用碳化二亚胺法(EDC)将AMP偶联于载体蛋白BSA,合成人工抗原BSA-AMP,用紫外扫描(Uv)和SDS-PAGE进行鉴定,推算分子结合比;用BSA-AMP免疫新西兰白兔,间接ELISA测定多抗血清(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,琼脂双扩散试验和交叉反应试验鉴定其特异性.结果表明,BSA-AMP偶联成功,分子结合比为1:17.6,获得了高效价、敏感、特异的AMP pAb,为AMP残留免疫学检测方法的建立奠定了基础.     

高亲和力莱克多巴胺单克隆抗体的研制及ciELISA检测方法的建立

  用混合酸酐法（MA）将莱克多巴胺（RAC）偶联于牛血清白蛋白（BSA）,合成人工抗原BSA-RAC,用UV和SDS-PAGE鉴定;用BSARAC免疫Balb/c小鼠,细胞融合技术建立高亲和力RAC单克隆抗体（mAb）杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备RAC mAb;应用RAC mAb研制RAC残留快速检测ciELISA试剂盒（RAC-Kit）,并测定其性能。结果表明,BSA-RAC偶联成功,分子结合比为24.5∶1;筛选出3株杂交瘤细胞,其中最好的4D8株亲和常数（Ka）为1.65×1010L/mol; RAC-Kit的检测限为0.5ng/ml,检测范围为0.5～151ng/ml,饲料样、猪尿样的平均添加回收率为87.2%,89.4%,平均批内和批间变异系数小于15%,与多巴酚丁胺的交叉反应率（CR%）为9.7%,与其它化合物无CR,RAC-Kit在4 ℃保存期为180d。     

高亲和力克伦特罗单克隆抗体的研制及免疫试纸检测方法的建立

重氮化法将克伦特罗（CL）偶联于BSA合成免疫抗原BSA-CL,戊二醛法（GA）合成包被抗原OVA-CL,用BSA-CL免疫Balb／C小鼠。细胞融合技术建立高亲和力CL单克隆抗体（CL mAb）杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备CL mAb,并测定其亲和性。依据胶体金免疫层析试验（GICA）原理,应用CL mAb研制CL残留快速检测免疫试纸（CL-Srip）,并测定其性能。结果表明,筛选出16株杂交瘤细胞,其中亲和力最高的为3C12—6H6,亲和常数（Ka）为1．76×10^10L／mol。CL-Strip的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,目测检测限为0．5μg／L;其敏感性与竞争ELISA试剂盒和GC／MS相当,符合率为100％。CL-Strip具有具有敏感、特异、快速、简便的特点,可推广应用于CL残留的快速检测。     

19-去甲类固醇激素检测方法研究进展

综述了19-去甲类固醇激素检测的筛选法、定量法和确证法,探讨了多残留同时检测试纸条和蛋白质芯片等最新技术。     

食品镉离子污染免疫检测技术的研究与应用

传统的理化分析方法在食品Cd2+污染检测方面发挥了重要的作用,但均存在一定的缺陷,急需建立快速、高效的检测方法.食品Cd2+污染免疫检测是一种新型的分析方法,与理化分析方法相比,具有省时省力、费用低廉、便于携带、操作简便等优点,已成为重要的检测手段.详细综述了目前国内外在食品Cd2+污染免疫检测方面的研究方法和成果,主要包括Cd2+人工抗原的制备与鉴定、Cd2+单克隆抗体的制备及免疫学特性影响因素分析和Cd2+免疫检测方法的建立及应用.在总结这些研究的基础上,展望了食品Cd2+污染免疫检测技术的发展方向.     

19-去甲睾酮异源性ciELISA试剂盒的研制及应用

筛选抗19-去甲睾酮（NT）单克隆抗体,建立异源性ciELISA试剂盒。用人工抗原NT-17-BSA免疫Balb/C小鼠,细胞融合技术建立1株抗NT单克隆杂交留细胞NT1-B7,同种型为IgG1 /k,腹水效价达0.64×105,亲和常数（Ka）为4.31×109 L/mol,半数抑制浓度（IC50）为0.55 ng/mL,与群勃龙和雌二醇的交叉反应率（CR）分别为2.2%和1.6%,与其它化合物无CR。异源性ciELISA试剂盒在猪肉、猪尿、牛肉和牛尿四种基质中的检测限分别为0.24、0.23、0.22和0.17 ng/mL,批内和批间相对标准差（RSD）在4.4％～21.8％,添加回收率在85％～110％,4 ℃下保存期至少6个月。NT-Kit的基质pH值适用范围为6.5～7.5,温育过程优化后可节约检测时间30～90 min。试剂盒灵敏度高、特异性强,可应用于样品基质中NT残留检测。     

猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIIA基因的序列分析及其B细胞表位预测

为了进一步研究猪胸膜肺炎放线杆菌(Actionobacillus pleuropneumoniae,App)ApxIIA基因的结构和功能,选取GenBank中6株不同App分离株,采用生物信息学方法对其ApxIIA基因及其编码氨基酸序列进行同源性比对,并选择其中AY232288.1菌株(湖北分离株)ApxIIA基因为研究对象,分析该基因所编码蛋白质的理化性质,并对其可能形成的二级结构及B细胞表位进行预测和分析.结果表明,6株不同App分离株ApxIIA基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别为65.56﹪和88.42﹪,在AY232288.1菌株ApxIIA蛋白的肽链中,745～751和801～807区段可能是其B细胞表位优势区.本研究首次利用生物信息学方法对ApxIIA基因及其蛋白质结构进行了分析和预测,为ApxIIA基因功能的深入研究及APP多表位疫苗的设计奠定了基础.     

19-去甲睾酮免疫学检测方法的筛选和优化

目的:19-去甲睾酮列为运动员和动物竞技比赛中的违禁药品,也禁止其以促进生长为目的在食源性动物生产中使用,该文研究其免疫学快速检测方法的筛选.方法:间接ELISA检测不同免疫时间对效价的影响,间接竞争ELISA研究阿源和异源性检测对抗体灵敏度的影响,不同孵育时间选择最佳检测方案.结果:NT-17-BSA为完全抗原制备兔多克隆抗体,以NT-3-OVA为包被原进行异源性ELISA检测,结果表明五免后可制备出高效价的NT pAb(1:25600),并获得最灵敏的IC50值(18ng/mL).同时,37℃条件下,2h包板和1h封闭的孵育方案获得最理想的吸光度值.结论:该研究所建立的检测方法可应用于19-去甲睾酮免疫学快速检测试剂盒的研制.