恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白自身偶联条件的优化及其聚体蛋白的制备

目的探讨影响恶性疟原虫合子/动合子表面25蛋白(25 k Da Plasmodium falciparum sexual stage protein,Pfs25)偶联的因素,优化Pfs25蛋白的偶联反应条件,制备具有免疫原性的Pfs25纯化聚体蛋白。方法通过对偶联反应时Pfs25蛋白浓度、偶联反应的酸碱度、不同的缓冲液及偶联试剂添加方式的探索,考察不同反应条件对Pfs25蛋白偶联的影响。凝胶过滤层析纯化Pfs25偶联反应产物,双抗体夹心ELISA和SDS-PAGE对凝胶柱洗脱液进行检测,Western blot检测纯化的Pfs25聚体蛋白。结果 Pfs25蛋白偶联反应选择1/15 mol/L Na_2HPO_4-KH_2PO_4为偶联缓冲液,反应体系在pH 5.6～6.0时偶联效果更好,而Pfs25蛋白反应质量浓度为25 mg/m L时可获得最佳的Pfs25偶联效率(68.67%),凝胶过滤层析法获得Pfs25聚体蛋白,经双抗体夹心ELISA和Western blot检测,形成的Pfs25聚体蛋白保持了与Pfs25蛋白相同的抗体结合能力。结论优化了Pfs25蛋白最佳偶联反应条件,获得具有免疫原性的Pfs25纯化聚体蛋白。在形成Pfs25聚体中,以二聚体(Pfs25)2为主要形式,兼有少量三聚体(Pfs25)3和四聚体(Pfs25)4。     

肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子对人肝星状细胞生物学行为的影响

目的:观察肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TWEAK)对人肝星状细胞(HSCs)株LX-2增殖、细胞周期、细胞凋亡、迁移及粘附能力的影响。方法:用不同浓度TWEAK培养LX-2细胞24或48 h,采用CCK-8法检测TWEAK对LX-2细胞增殖的影响,流式细胞术检测TWEAK对LX-2细胞周期和凋亡的影响,Transwell小室检测TWEAK对LX-2细胞迁移能力的影响,Matrigel基质胶检测TWEAK对LX-2细胞的粘附能力的影响。结果:与对照组相比,40 ng/m L和100 ng/m L TWEAK都能使LX-2细胞的迁移能力增强(P0.05),且100 ng/m L较40 ng/m L作用更强(P0.01);100 ng/m L TWEAK能够明显抑制LX-2细胞的粘附能力(P0.0001);40 ng/m L、100 ng/m L TWEAK对LX-2细胞的增殖、周期及凋亡无明显影响(P0.05)。结论:TWEAK能够增强LX-2细胞迁移能力,抑制其粘附能力。     

凯式定氮法替代苦味酸法测定注射用A型肉毒毒素中明胶含量的可行性研究

目的 探究采用凯式定氮法替代苦味酸法测定注射用A型肉毒毒素(botulinum toxin type A for injection)明胶含量的可行性,以期对注射用A型肉毒毒素明胶含量测定方法的变更起到借鉴作用。方法 通过专属性、准确度、重复性、中间精密度和耐用性验证,确认采用凯式定氮法测定注射用A型肉毒毒素明胶含量的数据可靠性;对凯式定氮法与现有苦味酸法测定注射用A型肉毒毒素明胶含量的结果采用配对t检验和Bland-Altman分析进行统计学分析,确定2种测定方法的一致性。结果 注射用A型肉毒毒素中右旋糖酐20、蔗糖、A型肉毒毒素复合物对明胶含量测定无干扰,该方法专属性良好;准确度回收率位于95%～99%之间;重复性RSD为0.73%;中间精密度RSD为2.10%;且耐用性良好,可采用凯式定氮法进行注射用A型肉毒毒素明胶含量的测定。同时与现有苦味酸法相比,配对t检验无统计学差异;Bland-Altman分析,2种方法测量的差值均位于测量差均值的95%置信区间内,说明2种方法一致性良好。结论 可采用凯式定氮法替代苦味酸法进行注射用A型肉毒毒素明胶含量的测定。