原位杂交检测大鼠前庭代偿中GAP-43 mRNA水平

用ＤＩＧ标记的ＧＡＰ－４３ｃＤＮＡ为探针,以大鼠海马切片作阳性对照,使用原位杂交方法检测了大鼠迷路损毁５,１２,２０和３０ｄ后前庭核区ＧＡＰ－４３ｍＲＮＡ水平的变化,结果表明,迷路损毁后前庭核区ｍＲＮＡ水平升高,原位杂交的应用,为前庭代偿中轴突发芽,突触重组的神经可塑性研究打下了方法学基础。     

CREB研究进展

CREB是cAMP应答元件结合蛋白(cAMPresponseelementbindingprotein)的简称,它于80年代后期被发现。CREB由341个氨基酸残基组成,分子量43000。分子结构分两个区域,N端区域与调节转录的功能有关,C端区域是与启动子结合的部位。CREB是CREBATF家族中的一个成员,它包括8种分子亚型,其中CREBα和CREBΔα最为重要。CREB是一种细胞核内调控因子,它通过自身磷酸化实现调节转录的功能。CREB与学习记忆分子神经机制的关系特别受到注意。CREB能促进果蝇和小鼠等动物长时程记忆的形成。开展对CREB在人类大脑记忆活动中功能的研究,是分子神经生物学家感兴趣的课题。     

原位杂交检测大鼠前庭代偿中GAP-43 mRNA水平

用DIG标记的GAP-43 cDNA为探针,以大鼠海马切片作阳性对照,使用原位杂交方法检测了大鼠迷路损毁5、12、20和30 d后前庭核区GAP-43 mRNA水平的变化.结果表明,迷路损毁后前庭核区mRNA水平升高.原位杂交的应用,为前庭代偿中轴突发芽,突触重组的神经可塑性研究打下了方法学基础.     

小鼠cAMP应答元件结合蛋白基因在大肠杆菌中的表达

采用PCR技术,删除了小鼠CREBcDNA5′端和3′端非编码序列,并引入便于基因操作的酶切位点。经30次循环的扩增,得到改造后的CREBcDNA,全长1071bp。亚克隆后,对此扩增片段进行了限制性内切酶物理图谱分析,测定了DNA序列,并以其为插入物,构建了pBV220-PCR-CREB重组表达载体。经Western印迹法分析证明,在大肠杆菌中的表达获得成功 。     

小鼠cAMP应答元件结合蛋白基因在大肠杆菌中的表达

采用ＰＣＲ技术,删除了小鼠ＣＲＥＢｃＤＮＡ５‘端和３’端非编码序列,并引入便于基因操作的酶切位点。经３０次循环的扩增,得到改造后的ＣＲＥＢｃＤＮＡ,全和工０７１ｂｐ。亚克隆后,对此扩增片段进行了限制性内切酶物理图谱分析,测定了ＤＮＡ序列,并以其为插入物,构建了ｐＢＶ２２０－ＰｃＲ ＣＲＥＢ重组表达载体Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法分析证明,在大肠杆菌中的表达获得成功。