应用寡核苷酸芯片筛选维甲酸诱导神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y分化成神经元过程中的差异表达基因

目的:应用寡核苷酸芯片筛选维甲酸(RA)诱导神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y分化成神经元过程中的差异表达基因。方法:从人胎脑及不同类型神经系统肿瘤组织中获取目的基因,查询相应基因mRNA序列,设计并合成探针,制备了含218种基因的神经功能相关的寡核苷酸芯片。应用RA诱导SH-SY5Y8d分化成成熟神经元,提取对照组和实验组每天的总RNA,通过逆转录荧光标记cDNA探针并与芯片杂交,洗片后扫描获取图像,数据分析获得差异表达基因,并通过RT-PCR进行验证。结果:发现13种基因表达上调,没有得到下调基因。RT-PCR验证结果基本与芯片结果一致。结论:SH-SY5Y经RA诱导分化成神经元存在一些差异表达的基因,寡核苷酸芯片技术可为研究SH-SY5Y诱导分化成神经元的分子作用机理提供技术平台。     

copine V蛋白的亚细胞定位

目的：确定copine V蛋白的亚细胞定位,初步研究该蛋白的生物学功能.方法：将copine V编码区基因分别构建真核表达载体pEGFP-copine V（或pRED-copine V）,转染HEK293、HeLa细胞,在激光共聚焦荧光显微镜下与转染空载体pEGFP-N1（或pRED-N1）的细胞比较观察.结果：经限制性内切酶分析鉴定,构建的重组表达载体正确.通过激光共聚焦荧光显微镜观察,转染了重组载体pEGFP-copine V的细胞荧光信号集中分布于胞膜和内膜系统;进一步研究表明copine V定位于内质网而非线粒体,而空载体则在整个细胞中均匀分布.结论：copine V蛋白定位于细胞膜和内质网上,而不定位于线粒体.     

外源过表达CPNE5基因增强HEK293细胞对Zeocin的敏感性

目的：探讨Zeocin处理是否能增强CPNE5基因诱导细胞凋亡的作用。方法：分别构建CPNE5基因稳定过表达和抑表达载体,转染HEK293细胞,形成克隆后,用RT-PCR、MTT法分析CPNE5基因过表达和抑表达的HEK293单克隆细胞对Zeocin作用的敏感性。结果：CPNE5基因过表达的HEK293单克隆细胞对Zeocin反应敏感性增加。结论：Zeocin能增强CPNE5基因诱导细胞凋亡的作用。     

乌鲁木齐地区乳腺癌与人乳头瘤病毒亚型感染的相关性研究

目的：对本地区乳腺癌患者癌组织进行人乳头瘤病毒（HPv）检测,对HPV亚型与乳腺癌的相关性进行研究。方法：选择本地区2010年1月-2013年1月182例乳腺癌患者作为研究组,同时选择30例乳腺良性肿瘤患者作为对照组,均分型基因芯片检测系统对提取的DNA进行分型检测。观察两组患者HPV感染情况及感染亚型。结果：两组患者HPV阳性病例67例,其中研究组阳性66例,阳性率为36．26％,对照组阳性1例,阳性率为3-33％;研究组阳性率明显高于对照组,两组比较差异具有显著性（P〈0．05）。亚型检测结果显示,共检出7种HPV亚型,其中高危型5种,分别为HPV16、HPV18、HPV58、HPV51和HPV56型,低危型两种,分别为HPV6、11两种。研究组高危型61例,低危型5例,对照组1例为HPV6。Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期乳腺癌患者HPV阳性率分别为16．28％、19．71％、62％、100％,Ⅲ期、Ⅳ期患者的阳性率明显高于Ⅰ期、Ⅱ期,不同分期阳性率比较差异具有显著性（P〈0．05）。结论：乳腺癌患者癌组织中HPV阳性率明显偏高,且绝大多数为高危亚型,而且HPV阳性率与病理分期呈正相关,说明本地区HPV感染与乳腺癌的发生与发展具有一定的相关性,两者的相关性还有待进一步探索。     

外源表达的人copine Ⅴ诱导细胞死亡的研究

目的:copines蛋白家族是新近发现的一类分布广泛、进化保守的Ca2 依赖性磷脂结合蛋白,copineⅤ是其成员之一。为研究copineⅤ基因的功能,构建了人copineⅤ基因的真核表达质粒并转染HEK293细胞,以进一步研究其功能。方法:构建人copineⅤ编码区序列的真核表达质粒pCDNA4/copineⅤ,脂质体法转染HEK293细胞。通过RT-PCR、克隆形成实验和Hochesst33342染色等方法观察copineⅤ基因对HEK293细胞生长的影响。结果:外源表达的人copineⅤ可以诱导HEK293细胞死亡,无法筛选到稳定克隆。结论:人copineⅤ可以诱导HEK293细胞死亡,为进一步研究copineⅤ基因的生物功能提供了线索。     

人copine Ⅴ蛋白多克隆抗体的制备

目的:制备兔抗人copine Ⅴ多克隆抗体.方法:将copineⅤ N端423 bp(626～1 048 bp)构建到原核表达载体pET28a( ),转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下进行蛋白表达;以镍柱纯化后的蛋白为抗原,与等体积佐剂混合后免疫家兔3次;用ELISA和Western印迹检测抗血清,用(NH4)2SO4沉淀法初步纯化抗体.结果:表达并纯化了copine Ⅴ N端蛋白,ELISA检测表明抗血清具有高亲和性,Western印迹检测表明抗体能特异性识别内源性和过表达的copine Ⅴ.结论:制备了具有高亲和性和特异性的抗人copine Ⅴ多克隆抗体.     

浅谈电能计量装置常见故障及防范对策

本文介绍了电能计量装置常见的故障和检查方法,阐述了加强电能计量装置故障细化分析的必要性,提出了电能计量装置故障的防范对策。     

外源表达的人copine V诱导细胞死亡的研究

目的：copines蛋白家族是新近发现的一类分布广泛、进化保守的Ca2＋依赖性磷脂结合蛋白,copineV是其成员之一.为研究copineV基因的功能,构建了人copineV基因的真核表达质粒并转染HEK293细胞,以进一步研究其功能.方法：构建人copineV编码区序列的真核表达质粒pCDNA4/copineV,脂质体法转染HEK293细胞.通过RT-PCR、克隆形成实验和Hochesst33342染色等方法观察copineV基因对HEK293细胞生长的影响.结果：外源表达的人copine V可以诱导HEK293细胞死亡,无法筛选到稳定克隆.结论：人copineV可以诱导HEK293细胞死亡,为进一步研究copineV基因的生物功能提供了线索.     

Rho激酶对结直肠癌细胞体外侵袭转移作用的研究

目的:观察Rho激酶对结直肠癌SW480细胞黏附、运动、迁移和侵袭能力的影响.方法:SW480细胞用Rho激酶抑制剂Y-27632处理后,分别用细胞运动实验,黏附实验和迁移、侵袭实验分析对肿瘤细胞运动、黏附、迁移和侵袭能力的影响.结果:25μmol/L以上的浓度的Y-27632作用于SW480细胞后,细胞的运动能力、迁移能力明显下降(p＜0.05),细胞黏附于纤维粘连蛋白的能力也降低(p＜0.05);而且细胞穿过人工基底膜的能力明显降低(p＜0.01).结论:Rho激酶参与结直肠癌细胞体外的侵袭转移作用,Rho激酶抑制剂有望成为有效的抗恶性肿瘤转移的药物.