基于基因芯片蝎毒多肽提取物对H22肝癌抑制作用的研究

目的:通过表达谱基因芯片研究蝎毒多肽提取物PESV对H22肝癌基因表达的影响,探讨其可能的药物作用机理.方法:建立H22肝癌皮下荷瘤模型,将60只昆明小鼠随机分为模型组、PESV组、Gemcitabine和TNP-40组,每组15只;无菌摘取皮下肿瘤组织,提取总RNA,通过反转录方法制备cDNA荧光探针,进行芯片杂交,然后对芯片进行图像扫描,最后用Imagene4.0软件包对荧光信号进行分析.结果:蝎毒多肽提取物PESV作用于荷瘤小鼠后,有127个基因表达下调,433个基因表达明显上调,其中35个基因与抗肿瘤血管生成药物TNP-470处理组下调基因一致,有40个与化疗药物Gemcitabine处理组下调基因一致.结论:蝎毒多肽提取物PESV可能同时具有细胞毒作用和抗血管生成作用双重作用,有望成为一种极具前景的肿瘤治疗药物.     

过表达miR-153非小细胞肺癌细胞稳转株的构建及鉴定

目的:构建过表达miR-153的非小细胞肺癌的稳转细胞株,为进一步探讨miR-153在肺癌发生发展中的作用奠定基础。方法:构建具有嘌呤霉素抗性的miR-153慢病毒载体;体外培养非小细胞肺癌细胞系SPC-A-1和A549,加入浓度梯度的嘌呤霉素溶液,筛选出最佳浓度;使用慢病毒转染细胞株,并在转染72 h后用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,评价转染效率;体外实验使用PCR检测miR-153在稳转株的表达;稳转株移植裸鼠体内成瘤,取出瘤体后检测瘤体内EGFP和miR-153的表达。结果:完成过表达miR-153慢病毒载体及阴性对照载体的构建;确定嘌呤霉素最佳筛选浓度:在SPC-A-1细胞中的浓度为2.0 g/mL,A549细胞中的浓度为3.0 g/mL;目的基因miR-153被慢病毒成功导入SPC-A-1细胞和A549细胞中,荧光显微镜下能直接观察到EGFP。转染miR-153组和阴性对照组的PCR实验结果显示:在SPC-A-1细胞中,miR-153的表达量为92.9±20.6,明显高于阴性对照组(P=0.016);在A549细胞中,miR-153的表达量为2624.6±153.4,显著高于阴性对照组(P0.001)。稳转株能在裸鼠体内形成移植瘤,瘤体内明显有EGFP的表达;与阴性对照组的瘤体相比,移植瘤组miR-153的表达量为显著上调(P=0.048)。结论:成功构建过表达miR-153的非小细胞肺癌的稳转细胞株。     

柞蚕雄蛾提取液对放疗后荷瘤大鼠Th1/Th2漂移的影响

目的:研究柞蚕雄蛾提取液对放疗后荷瘤大鼠Th1/Th2平衡的影响及机制.方法:60只雄性Wistar大鼠建立W256荷瘤模型,随机分为模型组、单纯放疗组和实验组即放疗联合蚕蛾提取液治疗组,每组各20只.单纯放疗组和实验组给予常规放疗,5Cy/天,连续照射2天,总量10Gy.照射后10天取大鼠脾脏和胸腺,并计算脏器指数;用流式细胞术(FCM)检测外周血T淋巴细胞亚群变化;用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定血清中Th1型细胞因子INF-γ和Th2型细胞因子IL-4含量;用免疫组化检测脾脏中Thl型细胞因子INF-γ、Th2型细胞因子IL-4表达变化.结果:实验组与单纯放疗组比较,荷瘤大鼠脾脏和胸腺指数升高;荷瘤大鼠外周血中CD4+T细胞比例与CD4+T/CD8+T值增加;荷瘤大鼠血清中细胞因子INF-γ含量明显升高,而IL-4含量显著降低;脾脏中INF-γ表达增加,几4表达减弱.结论:柞蚕雄蛾提取液可以改善荷瘤大鼠放疗后免疫功能抑制状态,改变荷瘤机体免疫功能,可作为恶性肿瘤传统放疗中的辅助用药.