响应面法优化重组大肠杆菌产蔗糖异构酶发酵培养基

通过碳氮源的不同浓度对重组大肠杆菌E.coil BL21(DE3)发酵产蔗糖异构酶(SIase)的影响,并借助于数学分析软件Design Expert,结合Plackett-Burman试验设计和中心复合试验设计分析法,对蔗糖异构酶的产生菌进行了发酵培养基的优化研究。实验表明,最佳培养基组分为甘蔗糖蜜10.65 g/L,玉米浆22.22 g/L,NaCl 7.57 g/L ,MgSO₄·7H₂O 0.52 g/L, KH₂PO₄ 4.46g/L,优化后的蔗糖异构酶活力达到29.1U/ml,比LB培养基培养重组大肠杆菌(15U/ml),蔗糖异构酶活力提高了94%,与原始菌大黄欧文菌NX-5相比提高了21.4倍(1.3U/ml)。     

乌司他丁对老年患者下肢关节置换术后认知功能障碍的影响

目的：观察乌司他丁对老年患者下肢关节置换术后认知功能障碍的影响。方法：择期行下肢骨折内固定手术的老年患者40例,随机分为2组：乌司他丁组（UTI组,20例）于手术开始时和术后6 h分别给予乌司他丁200,000U,静滴;对照组（CON组,20例）则给予100 mL生理盐水滴注。分别于术前、术后7天（D7）及术后1个月（M1）进行简易精神状态量表（MMSE）评估患者的认知功能。术前、手术结束时及术后24小时,采静脉血检测炎症因子IL-1β、IL-8和TNF-α。结果：UTI组术后7天及1月MMSE评分均显著低于CON（P〈0.05）,但POCD的发生率并无明显差异。术后24h时UTI组的IL-β显著低于CON组（P〈0.05）,而IL-8显著高于CON组（P〈0.05）;而TNF-α在各时间点均无显著性差异。结论：围术期应用乌司他丁可有效改善术后认知功能,其作用机制可能与抑制术后炎症反应相关。     

适用于野生型枯草芽孢杆菌转化有机溶剂方法的建立和优化

用经典的spizizen方法将穿梭质粒pLJ导入Bacillus subtilis168、Bacillus subtilisWB600、Baci／／ussubtihsW-B800中,均能达到70多个转化子／μgDNA的较高转化效率,但用此方法将该质粒导入由本实验室筛选并保存的野生型BacillussubtilisNx-2中,不能获得转化子。本研究对spizizen转化方法进行了改进。通过添加不同浓度的吐温-80,DMSO、丙酮、甲苯、乙醇等有机溶剂,均能获得转化子。同时,本研究对转化条件进行了优化,分别选取吐温-80、DMSO、甲苯等3种效果较好的添加剂设计正交实验。试验结果表明,在添加4％吐温-80、3％DMSO、1％甲苯的条件下得到了34个转化子／斗gDNA的较高转化效率。还研究了质粒与感受态共培养时间和感受态稀释倍数对转化的影响,当质粒与感受态共培养时间为3h,感受态稀释5倍时．转化效率较高。     

远程缺血预处理通过升高Treg cells的表达参与脑保护作用

目的:探讨远程缺血预处理后,急性脑卒中24 h,72 h时脾脏组织Treg cells水平的表达变化,阐述远程缺血预处理对Treg cells的调节及其在急性脑卒中缺血期的保护作用。方法:60只昆明小鼠随机分为3组,sham组、MCAO组、远程缺血预处理+MCAO组(n=20只/组),建立小鼠MCAO模型,缺血60分再灌注后在24 h,72 h时进行神经功能缺陷评分(NDS),随后处死小鼠行氯化三苯基四氮唑(TTC)脑片染色,观察脑梗死容积变化。运用流式细胞仪检测脾脏组织Treg cells的表达。ELISA检测脑组织中炎症因子IFN-γ的表达。结果:在72 h时远程缺血预处理组与对照组相比,脑梗死容积减少,神经障碍减轻,脾脏Treg cells的表达上升,脑组织炎症因子IFN-γ的表达下降,P0.05,而24 h Treg cells的表达水平并未发生明显变化,P0.05。结论:在脑卒中急性期,远程缺血预处理通过升高Treg cells的表达参与脑保护作用。     

腹腔注射酵母多糖后小鼠脾脏Foxp3 的变化

目的:通过观察小鼠症状和脾脏大小及脾脏中Foxp3的变化,阐述脾脏Foxp3在酵母多糖(zymosan)所致炎性反应中的作用。方法:采用免疫荧光染色检测正常和腹腔注射酵母多糖后各个时间点小鼠脾脏中Foxp3的变化过程。结果:小鼠6h出现中毒症状,1d,2d时症状最重,死亡率最高;Foxp3在脾脏中的表达在6h时开始减少,3d最少,5d时开始增加(P<0.05)。结论:小鼠脾脏Foxp3变化过程为先下降后升高;Treg在酵母多糖引起的炎症反应中起着重要的作用。     

连续股神经阻滞联合关节周围注射用于全膝关节置换术后镇痛及早期功能康复的研究

目的:比较连续股神经阻滞(continuous femoral nerve block,CFNB)联合关节周围注射和单纯连续股神经阻滞对全膝关节置换(TKA)术后疼痛及早期功能康复的影响.方法:将2012年1月～2012年9月于我院初次行单侧全膝关节置换的40例患者随机分为CFNB联合关节周围注射组(n=20例)和CFNB治疗组(n=20例).观察和比较两组患者术后疼痛评分、CPM度数、被动屈伸活动度、围术期CRP水平及术后下肢深静脉血栓形成情况.结果:术后8h、12h,CFNB联合关节周围注射组的疼痛评分分别为2.45±0.2562和2.40±0.3026,明显低于CFNB组(5.25±0.3470和4.90±0.3692),差异均有统计学意义(P＜0.05);术后第2、3天,CFNB联合关节周围注射组的CPM锻炼度数(72.75± 2.750、89.00±2.283)分别明显高于CFNB组(57.95±1.724、79.00± 2.194),差异均有统计学意义(P＜0.05);两组患者术后膝关节被动活动度比较无统计学差异;CFNB联合关节周围注射组术后患者血清CRP水平低于CFNB组,均在术后第3天达到峰值,但组间比较均无统计学差异(P＞0.05);两组患者术后双下肢深静脉血栓形成情况比较无统计学差异.结论:连续股神经阻滞联合关节周围注射较单纯连续股神经阻滞可更加有效降低全膝关节置换术患者术后的疼痛评分,并促进早期功能康复.     

代谢木糖重组谷氨酸棒杆菌的构建

为了使谷氨酸棒杆菌较好地利用木糖生产有机酸,将来自Escherichia coli K-12的木糖异构酶基因xylA构建到表达载体pXMJ19中,导入Corynebacterium glutamicum ATCC13032Δldh中,成功表达了该酶基因。结果表明:重组菌株在以木糖为唯一C源进行发酵时,木糖的消耗速率为0.54 g/(L·h),木糖异构酶比酶活约为0.54 U/mL;在以木糖和葡萄糖的混合糖为C源进行发酵时,菌株优先利用葡萄糖,在葡萄糖完全消耗后,菌株开始有效利用木糖;以木糖为唯一C源进行两阶段发酵时,琥珀酸的收率可达(0.62±0.003)g/g。