脂多糖致急性肺血管内皮屏障功能失调小鼠FLI-1蛋白表达的变化及其意义

目的: 观察感染性急性肺损伤(ALI)肺血管内皮屏障功能失调小鼠肺组织中弗里德白血病病毒插入位点1(FLI-1)蛋白表达的变化,以探讨FLI-1在感染性ALI肺血管内皮屏障功能失调发生发展中的意义。方法: SPF级雄性ICR小鼠60只,腹腔注射脂多糖(LPS,7.5 mg/kg)复制ALI模型,在给予LPS 0 h、12 h、24 h、48 h后,检测小鼠肺血管内皮屏障通透性和肺湿干重比,ELISA法检测肺泡灌洗液中TNF-α和IL-6含量,Western blot法检测肺组织FLI-1和Src酪氨酸激酶(SRC)蛋白的表达。结果: 与0 h组比较,12 h组、24 h组肺血管内皮屏障通透性分别升高74.3%和162.4%,而48 h组较24 h组降低27.0%(P均＜0.05);与0 h组比较,12 h组、24 h组肺湿干重比分别升高50.1%和122.9%,而48 h组较24 h组降低10.7%(P均＜0.05);与0 h组比较,12 h、24 h肺泡灌洗液IL-6和TNF-α含量均显著升高,而48 h肺泡灌洗液IL-6和TNF-α含量较24 h分别下降28.3%和21.6%(P均＜ 0.05);与0 h组比较,12 h组、24 h组肺组织FLI-1蛋白表达水平分别下调20.4%和56.9%,而48 h组较24 h组上调18.2%(P均＜0.05);与0 h组比较,12 h组、24 h组肺组织SRC蛋白表达水平分别上调76.8%和176.7%,而48 h组较24 h组下调33.4%(P均＜0.05);肺血管内皮屏障通透性与FLI-1蛋白表达水平呈显著负相关(r= -0.8992,P＜0.01),而与SRC蛋白表达水平呈显著正相关(r=0.8918,P＜0.01),肺组织FLI-1与SRC蛋白表达呈显著负相关(r=-0.8087,P=0.0014)。结论: FLI-1可能参与LPS诱导的急性肺损伤肺血管内皮屏障功能失常过程。     

间断低氧大鼠饲养舱的研制和初步应用

目的设计制造自动控制的长期间断低氧大鼠饲养舱,以建立符合睡眠呼吸暂停综合征（SAS）特征的大鼠模型。方法①由单片机自动控制,通过电磁阀控制供应各气体的流量,使饲养舱内的氧浓度能够在9%～21%的范围内快速地变化。②50只SD大鼠均分为五组,即间断低氧2周组（2H）和4周组（4H）、空气对照2周组（2C）和4周组（4C）及正常对照组（NC）。间断低氧组在密闭的舱中间断性地呼吸低氧气体,90s一次循环,每天8h,每周7d。对照组呼吸空气。结果通过单片机能自动调节医用氮气与氧气的输入,使舱内低氧时氧浓度在9.0%±1.5%,复氧时氧浓度在21.0%±0.5%。大鼠平均肺动脉压：2H组较2C组高18.71%,4H组较4C组高16.87%（P均〈0.05）;右心室收缩末期压及最大变化速率RVESP、RV＋dp/dt和RV-dp/dt：4H组较4C组分别高36.36%、56.35%和55.43%（P均〈0.01）,4H组比2H组分别高88.85%、19.49%和80.97%（P均〈0.01）;而2C组、4C组与NC组上述指标各组间均无显著性差异（P均〉0.05）。结论该大鼠饲养舱能自动、精确控制舱内氧浓度、循环时间,能复制出比较符合SAS病理生理变化特征的动物模型。     

低氧性肺动脉高压小鼠肺组织apoE蛋白表达的变化及其意义

目的：观察低氧性肺动脉高压小鼠肺组织中载脂蛋白E（apoE）蛋白表达的变化,以探讨低氧性肺动脉高压形成过程中apoE蛋白表达的变化及可能的意义。方法：SPF级雄性野生型（WT）C57BL/6小鼠和雄性apoE基因敲除（apoE-KO）小鼠各20只,各随机再分为2组（n=10）：常氧组和低氧组,共4组。常压连续低氧3周（9%~11% O₂,23 h/d）复制慢性低氧性肺动脉高压模型,采用右心导管法测定小鼠右心室压（RVSP）,计算右心室与左心室加室间隔重量比RV/（LV+S）,ELISA法检测血浆中高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）和总胆固醇（TC）的含量;Western blot法检测肺组织中apoE和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）蛋白的表达。结果：①低氧组WT小鼠RVSP、RV/（LV+S）分别较常氧组高68%和59%（P均<0.05）,血浆中HDL含量及HDL/LDL比值分别较常氧组低17%和40%（P均<0.05）,同时肺、肝组织中apoE及肺组织中PPARγ的蛋白表达分别较常氧组下调48%、52%和37%（P均<0.05）,RVSP与apoE及PPARγ蛋白表达均呈显著负相关（P均<0.01）;②低氧组apoE-KO小鼠RVSP、RV/（LV+S）较常氧组分别高96%和86%（P均<0.05）,低氧组apoE-KO小鼠RVSP和RV/（LV+S）较低氧组WT小鼠分别高29%和24%（P均<0.05）。结论：小鼠低氧性肺动脉高压的形成与肺组织中apoE蛋白表达下调有关。     

外源性apelin对大鼠慢性低氧性肺动脉高压的防治作用

目的:探讨外源性给予小分子活性肽apelin对大鼠慢性低氧性肺动脉高压和肺血管重构的作用及其机制。方法:采用常压低氧法建立SD大鼠低氧性肺动脉高压模型。实验分4组(n=10)对照组(NC)、低氧组(HH)、低氧+apelin低剂量组(5nmol/(kg.d)(LA)和低氧+apelin高剂量组(10nmol/(kg.d)(HA),HA组和LA组通过皮下埋植微量渗透泵持续给药。低氧4周后,测定平均肺动脉压(mPAP)、右心室与左心室加室间隔的重量比[RV/(LV+S)]、肺细小动脉管壁面积/管总面积(WA/TA)、管腔面积/管总面积(CA/TA)、中膜厚度(PAMT)以及肺组织超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)含量。结果:①mPAP和RV/(LV+S):HH组较NC组高,HA组较HH组低;LA组mPAP较HH低,而RV/(LV+S)两组间无显著性差异。②WA/TA和PAMT:HH组较NC组高,HA组、LA组均较HH低。③CA/TA:HH组较NC组低,HA组、LA组均较HH高。④肺组织SOD含量:HH组较NC低,HA组、LA组均较HH高。⑤MDA含量:HH组较NC高,HA组、LA组均较HH低。结论:Apelin对低氧性肺动脉高压和肺血管重构的形成具有防治作用,这种作用可能与直接舒张肺血管作用及改善氧化应激有关。     

Apelin对改善小鼠低氧性肺动脉高压的作用及与调节脂质代谢的关系

目的：探讨外源性apelin对小鼠慢性低氧性肺动脉高压的作用及其机制。方法：SPF级雄性apoE基因敲除（apoE-KO）小鼠30只,随机均分为3组（n=10）,即常氧组、低氧组和低氧+apelin组,apelin组小鼠每天于低氧前经腹腔注射apelin-13（10 nmol/（kg·d））,其他组腹腔注射相同体积的生理盐水。采用常压连续低氧方法（9%~11% O₂,23 h/d）复制慢性低氧性肺动脉高压模型。低氧3周后,采用右心导管法测定小鼠右心室压（RVSP）和右心室与左心室加室间隔重量比,Elisa法检测血浆中高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）和总胆固醇（TC）的含量;real-time PCR法检测肝组织中三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）、清道夫受体B1（SR-B1）、低密度脂蛋白受体（LDLR）和3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMGCR）等基因的表达。Western blot法检测小鼠肺组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）蛋白的表达。结果：①低氧组小鼠RVSP、RV/（LV+S）较常氧组分别高87%、85%（P均<0.05）,apelin组小鼠RVSP、RV/（LV+S）较低氧组分别低39%、33%（P均<0.05）。②apelin组小鼠血浆中HDL-C含量、HDL/LDL比值分别较hypoxia组高21%、20%（P均<0.05）,而血浆中TC、LDL-C含量两组间无显著差异（P均>0.05）。③apelin组小鼠肝组织中LDLR、SR-B1、ABCA1基因表达分别较低氧组上调241%、112%、69%（P均<0.05）,而HMGCR基因表达下调45%（P<0.05）。④apelin组小鼠肺组织中PPARγ蛋白表达较低氧组上调47%。结论：Apelin可降低小鼠低氧性肺动脉高压,其机制与调节脂质代谢有关。     

低氧性肺动脉高压小鼠体内脂质水平的变化

目的：观察低氧性肺动脉高压小鼠体内脂质代谢的变化,探讨脂质代谢异常在低氧性肺动脉高压发生发展中的意义。方法：SPF级雄性C57BL/6小鼠20只,随机分为2组（n=10）：常氧组和低氧组。常压连续低氧3周（9%~11% O₂,23 h/d）复制慢性低氧性肺动脉高压模型,测定小鼠右心室压（RVSP）和右心室与左心室加室间隔重量比,Elisa法检测血浆中总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）的含量;real-time PCR法检测肝组织中3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMGCR）、低密度脂蛋白受体（LDLR）、清道夫受体B1（SR-B1）、固醇调节元件结合因子2（SREBF2）等基因的表达。结果：低氧组小鼠RVSP、RV/（LV+S）显著高于常氧组（P<0.05）,血浆中HDL含量及HDL/LDL比值较常氧组显著降低（P<0.05）,肝组织中LDLR、SR-B1基因表达较常氧组显著下调（P<0.05）;RVSP与HDL/LDL比值及LDLR、SR-B1基因表达呈显著负相关（P<0.05）。结论：脂质代谢异常参与小鼠低氧性肺动脉高压的形成。     

载脂蛋白E对低氧诱导小鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及其机制*

目的:探讨外源性载脂蛋白E(apoE)对低氧诱导小鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响及其机制。方法:采用组织块贴壁法原代培养小鼠PASMCs,取对数生长期PASMCs,分常氧组、常氧+apoE组、低氧组和低氧+apoE组,常氧组培养条件为:21% O₂、5% CO₂,低氧组培养条件为:1% O₂、5% CO₂,外源性加apoE使终浓度为10 μg/ml,培养时间为48 h,重复三次。EdU掺入法检测细胞增殖情况,Western blot法检测apoE、增殖细胞核抗原(PCNA)、蛋白激酶C(PKC)和磷酸化蛋白激酶C(p-PKC)蛋白的表达。结果:与常氧组比较,低氧组PASMCs增殖率提高64.7%,PCNA蛋白和p-PKC蛋白表达分别上调69.0%和120.0%,而apoE蛋白表达下调51.0%(P均＜0.05);与低氧组比较,低氧+apoE组PASMCs增殖率降低19.6%,PCNA蛋白和p-PKC蛋白表达分别下调19.8%和103.2%(P均＜0.05);各组间PKC蛋白表达无显著性差异,常氧组p-PKC蛋白表达与常氧+apoE组的相比也无显著性差异(P均＞0.05)。结论:apoE能抑制低氧诱导小鼠PASMCs增殖,其机制可能与阻碍PKC途径有关。