检测钙调素的NAD激酶法

drClinmillWUShu－Pins,ZHANGXue－on,WANGJian－Ping,WANGYou－Al（HdriN～］ned．8彻加部办呼050016）磷酸二酯酶（PDE）定量测定活性钙调素（CaM）是国内外普遍应用的酶学方法［1］,而用NAD激酶（NADK）法检测活性CaM,虽早已提出[3],但应用并不普遍,国内尤为如此。多年来,我们研究了提取植物NADK及测定活性的方法[2],并用此法于红萝卜,玉米、豌豆、水稻、白茫、衣藻、四膜虫,人血细胞等多种生物的活性CaM的定性和定量检测,证实它与PDE法相比,有提取较为简易,灵敏度高,检测程序简便等多种优点;此外,…     

钙调素参与玉米线粒体琥珀酸脱氢酶活性的调节

经DEAE C-32柱纯化的玉米(Zea mays L.)线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH),用NAD激酶(NADK)法测定时,无钙调素(CaM)活性,说明不存在游离CaM;而用ELISA法测定总CaM时,却可检测到CaM。纯化的SDH加热处理后,能激活NADK,可能加热释放出游离CaM。纯化SDH的电泳分析表明,天然聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)只显示1条主带;而SDS-PAGE则出现67.0kD、30.0kD、16.7kD 3条带,前两条带与SDH的大、小亚基分子量一致,第三条带与CaM电泳迁移率一致。上述结果说明CaM可能与SDH处于结合状态,而且其活性受CaM调节。