铁皮石斛蔗糖磷酸合成酶基因的克隆与原核表达

应用同源序列克隆法克隆了铁皮石斛蔗糖磷酸合成酶(SPS)基因cDNA全长,并进行了原核表达分析,为进一步研究该基因的时空表达、功能分析及多糖合成机理提供理论依据。结果表明:(1)铁皮石斛SPS基因cDNA全长3 502bp,编码区3 186bp,GenBank登录号JF423929。该基因编码1 061个氨基酸,与文心兰的SPS基因氨基酸序列的一致性最高为93%,与其他科植物SPS基因的氨基酸序列的一致性均高于60%。(2)原核诱导表达结果显示,SPS基因在大肠杆菌中的重组蛋白分子质量约为118.7kD,其表达与序列分析推测的结论一致。(3)生物信息学分析表明,铁皮石斛SPS基因的二级结构包括了螺旋、β-折叠和无规则卷曲,是非跨膜结构的亲水性不稳定蛋白,有2个功能结构域,分别是蔗糖合成功能域及糖基转移功能域。     

梳唇石斛成熟胚的离体培养和植株再生

1植物名称梳唇石斛(Dendrobium strongylanthum Rchb.f.). 2材料类别成熟种子. 3培养条件以MS和1/2MS为基本培养基.(1)种子萌发培养基:MS NAA 0.2 mg·L-1(单位下同) 6-BA 0.4 马铃薯汁200g·L-1;(2)原球茎诱导增殖培养基:1/2MS 6-BA 0.5;(3)原球茎分化培养基:1/2MS 6-BA 0.5 NAA 0.5 椰子汁200g·L-1 ;(4)壮苗及生根培养基:1/2MS NAA 0.5 香蕉泥100g·L-1 .上述培养基均附加20 g·L-1 蔗糖、8 g·L-1琼脂,pH 5.5～5.8.培养温度为(24±2)℃,光照时间12 h·d-1,光照度1 000～2000 lx.