工业有机污染对小型水体沉积物真菌群落的影响分析

【背景】有机污染对水体沉积物中的微生物多样性影响极大,而目前有关污染水体沉积物中真菌多样性的研究较少。【目的】研究不同程度有机污染下水体沉积物中真菌种群的多样性特征,探究工业有机污染对真菌群落的影响。【方法】应用化学分析方法和高通量测序技术进行研究,并分析水质、沉积物成分等环境因子与沉积物真菌多样性的相关性。【结果】随着污染程度的降低,水体沉积物中真菌序列数、OTU数和Shannon多样性指数均呈上升趋势。未分类真菌、子囊菌门和担子菌门是沉积物真菌群落中的主要优势种类,主要优势属为Zopfiella、Westerdykella、Clypeosphaeria、Ilyonectria、Paracremonium、Aspergillus。真菌Shannon指数与水体溶解氧(dissolvedoxygen,DO)极显著正相关,与沉积物有机质和总磷含量显著负相关,Simpson指数与水体总氮(total nitrogen,TN)、氨氮(NH3-N)、总磷(total phosphorus,TP)显著相关。【结论】有机污染导致水体溶解氧下降和沉积物有机质增加,从而导致污染区真菌多样性显著下降。Zopfiella、Penicillium、Emericellopsis、Westerdykella、Jugulospora、Chromelosporium可能参与曝气处理区域沉积物兼氧条件下污染物的去除,Ilyonectria、Mortierella、Epicoccum可能主要参与水生生物残体分解、污染物的吸附沉降等过程。     

绿洲边缘夹粘沙丘持水特性

夹粘沙丘是指剖面中分布有一层红褐色粘化层的沙丘,其夹粘层埋藏深度常在120—500cm左右,厚度在40—100cm之间,粘粉粒含量达到90%以上。夹粘沙丘人工梭梭固沙植被郁闭度在0.5以上,明显高于相同水热条件下的植被生产力,这可能与夹粘层通过改变土壤持水性及水分状况,从而提高了土壤水分承载力有关。以河西走廊绿洲边缘夹粘沙丘为研究对象,在测定0—8.0m剖面土壤物理性质和土壤水分特征曲线的基础上,计算了土壤孔隙分布和持水特性,研究了剖面中土壤持水性的变化规律及其影响因素。结果表明:(1)夹粘层土壤含水量最高,上覆沙土土壤含水量最少且随深度增加而增加,下伏沙土受地下水毛管作用影响水分含量较高;(2)土壤机械组成决定了不同土层的持水特性,土壤中粘粉粒含量越高,田间持水量和饱和含水量就越大,夹粘层的土壤持水性远高于沙土层;(3)夹粘层是沙丘土壤水分暂时贮存的重要土层,可以为植被提供深层土壤水分,这对绿洲边缘人工固沙植被的生存和繁衍有重要影响,而土壤持水性和毛管作用的强弱决定了夹粘层对沙丘水分调节能力的强弱。本研究为深入理解绿洲边缘雨养固沙植被斑块状分布的机理提供了一定的理论依据。     

慢性牙周炎合并2型糖尿病患者龈沟液Sirtuin-1、Sirtuin-6的变化及临床价值研究

摘要 目的：探讨慢性牙周炎（CP）合并2型糖尿病（T2DM）患者龈沟液沉默信息调节因子-1（Sirtuin-1）、Sirtuin-6的变化和临床价值。方法：选择2020年3月至2023年3月中国人民解放军联勤保障部队第九七〇医院收治的147例CP合并T2DM患者（T2DM组）,128例单纯CP患者（CP组）和121例健康体检者（对照组）。根据牙周检查结果将T2DM组患者分为轻度组（n=49）、中度组（n=67）、重度组（n=31）。检测受试者龈沟液中Sirtuin-1、Sirtuin-6水平以及外周血单核细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域亚家族成员3（NLRP3）信使核糖核酸（mRNA）、程序性细胞死亡相关斑点样蛋白（ASC）mRNA、半胱氨酸蛋白酶1（Caspase-1）mRNA表达,并评估牙周临床指标。Pearson分析CP合并T2DM患者龈沟液Sirtuin-1、Sirtuin-6水平与牙周临床指标、外周血单核细胞NLRP3 mRNA、ASC mRNA、Caspase-1 mRNA表达的相关性。受试者工作特征（ROC）曲线分析龈沟液Sirtuin-1、Sirtuin-6诊断CP合并T2DM的价值。结果：T2DM组龈沟液Sirtuin-1、Sirtuin-6水平低于CP组和对照组（P＜0.05）,出血指数（SBI）、牙周袋探诊深度（PD）、牙龈指数（GI）、菌斑指数（PLI）、附着丧失（AL）、外周血单核细胞NLRP3 mRNA、ASC mRNA、Caspase-1 mRNA表达高于CP组和对照组（P＜0.05）。CP组龈沟液Sirtuin-1、Sirtuin-6水平低于和对照组（P＜0.05）,GI、SBI、PLI、PD、AL、外周血单核细胞NLRP3 mRNA、ASC mRNA、Caspase-1 mRNA表达高于对照组（P＜0.05）。重度组龈沟液Sirtuin-1、Sirtuin-6水平低于中度组和轻度组（P＜0.05）,GI、PLI、SBI、AL、PD、外周血单核细胞NLRP3 mRNA、ASC mRNA、Caspase-1 mRNA表达高于中度组和轻度组（P＜0.05）。中度组龈沟液Sirtuin-1、Sirtuin-6水平低于轻度组（P＜0.05）,GI、PLI、SBI、AL、PD、外周血单核细胞NLRP3 mRNA、ASC mRNA、Caspase-1 mRNA表达高于轻度组（P＜0.05）。CP合并T2DM患者龈沟液Sirtuin-1、 Sirtuin-6水平与GI、PLI、SBI、AL、PD、外周血单核细胞NLRP3 mRNA、ASC mRNA、Caspase-1 mRNA表达均呈负相关（P＜0.05）。龈沟液Sirtuin-1、 Sirtuin-6诊断CP合并T2DM的曲线下面积（AUC）为0.787、0.806,联合诊断AUC为0.912,高于单独诊断。结论：CP合并T2DM患者龈沟液中Sirtuin-1、Sirtuin-6水平降低,且与牙周组织破坏程度加重、NLRP3炎症小体激活有关。龈沟液Sirtuin-1联合Sirtuin-6在CP合并T2DM诊断中具有较高价值。     

不同培养代次对经血源子宫内膜干细胞生物学活性的影响

该研究明确了不同培养代次经血源子宫内膜干细胞(menstrual blood derived endometrial stem cells,MenSCs)的生物学活性差异,为深入研究MenSCs生物学特性及其潜在临床应用提供理论支持。该研究使用钙黄绿素AM(Calcein-AM)染色检测体外培养至第三代(passage 3,P3)、P9和P15代MenSCs的形态;β-半乳糖苷酶染色检测不同培养代次MenSCs的衰老程度;活性氧试剂盒检测不同培养代次MenSCs中活性氧的变化;随后利用MTT、流式细胞术及细胞活死染色在接触式共培养条件下检测P3、P9和P15代MenSCs对小鼠脾淋巴细胞活性、细胞周期、死亡情况以及脾脏淋巴细胞中CD3^+和CD19^+淋巴细胞比例的影响。结果表明,随着培养代次的增加MenSCs细胞面积显著增大,在培养至P15代时MenSCs开始出现大量丝状伪足。衰老程度及活性氧的含量也随培养代次的增加而显著升高;随后与MenSCs接触式共培养体显著增加了小鼠脾淋巴细胞的活性,降低淋巴细胞死亡率,且随培养代次的增加,MenSCs对促进淋巴细胞存活、降低死亡的能力显著降低;进一步细胞周期检测发现,MenSCs无刺激淋巴细胞增殖分裂活性,但可显著降低淋巴细胞死亡及碎片化,且培养代次的增加可显著降低MenSCs维持淋巴细胞存活的能力;此外,不同培养代次MenSCs在体外均对小鼠脾淋巴细胞中CD3^+和CD19^+细胞亚群百分比无显著性影响。综上,MenSCs随着体外培养时间和代次的增加,出现明显的生物学活性降低等特征,且对淋巴细胞活性的调节能力显著降低,上述结果为临床应用中保障MenSCs质量、平衡细胞培养代次和细胞数量及保证稳定的MenSCs临床治疗效果提供理论支持。     

金黄色葡萄球菌类肠毒素K与GFP融合蛋白工程菌的构建及其表达蛋白生物学活性分析

目的:构建携带金黄色葡萄球菌类肠毒素K(staphylococcal enterotoxin-like K,SElK)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)融合基因的工程菌,并对SElK-GFP融合蛋白进行初步生物学活性分析。方法:利用PCR和Overlap PCR克隆获得SElK-GFP融合基因,并插入pET28a表达载体中,通过菌落PCR,质粒双酶切及测序验证后,将构建成功的pET28a-SElK-GFP质粒转化到E. coli BL21菌株中进行诱导表达,通过Ni+亲和磁珠试剂盒纯化获得SElK-GFP融合蛋白;并利用MTT法检测SElK-GFP刺激小鼠脾淋巴细胞增殖; ELISA法检测SElK-GFP尾静脉注射后小鼠血清中细胞因子IL-2和IFN-γ的分泌水平。结果:成功构建能够表达SElK-GFP融合蛋白的工程菌,纯化获得高纯度的SElK-GFP融合蛋白可观测到明显的绿色荧光,融合蛋白生物学活性分析表明,SElK-GFP能够呈剂量依赖性地显著刺激小鼠脾淋巴细胞增殖;同时ELISA检测发现SElK-GFP可显著增加小鼠血清中细胞因子IL-2及IFN-γ的分泌水平。结论:成功克隆、表达及纯化获得高纯度的SElK-GFP融合蛋白,其不仅保留了SElK的超抗原活性,同时兼具GFP绿色荧光的可视性,为深入研究SElK生物学活性提供有利工具。