CpTI蛋白在大肠杆菌中的高效融合表达及其纯化与活性测定

豇豆胰蛋白酶抑制剂 (Cowpea Trypsin Inhibitor) 基因 (CpTI) 因其抗虫谱广及不易耐受等优点在植物基因工程中得到广泛应用。为进行遗传修饰食品（Genetically modified foods, GMF）中所含CpTI基因表达产物的安全性评价,我们需要在体外微生物体系中获得大量的CpTI蛋白。采用pGEX融合蛋白表达系统,将CpTI与GST的编码序列在大肠杆菌BL21中进行融合表达,表达产物达到菌体总蛋白的40%。经一步Glutathione Sephrose 4B亲和纯化,融合蛋白GSTCpTI纯度达到90％以上。将Thrombin蛋白酶与融合蛋白过夜作用,可获得切掉了GST标签的CpTI蛋白。活性测定显示GSTCpTI及CpTI蛋白均具有明显的胰蛋白酶抑制剂活性。用纯化的融合蛋白免疫家兔还可诱导产生高效价的抗体,经ELISA检测抗体滴度>1∶20000。Western Blotting 实验显示,无论是菌体超声裂解后总蛋白中的CpTI蛋白或是经纯化后的CpTI蛋白均可与自制的抗体发生特异性结合。这为进一步进行CpTI蛋白的安全性评价工作奠定了良好基础。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定血清中维生素A、E的方法研究

目的：建立超高效液相色谱 串联质谱（UPLC MS/MS）同时测定血清中维生素A、E的方法。方法：取标准系列工作溶液、空白替代血清样品（4% BSA牛血清白蛋白溶液）各50 μL,经硫酸锌、沉淀剂（甲醇/乙腈=50/50,V/V）沉淀蛋白,振荡,12 000 r/min离心5 min,取上清,低压离心挥干,复溶振荡,12 000 r/min离心5 min,取上清待测。采用Waters BEH Phenyl色谱（2.1 mm×100 mm,1.7 μm）分离,以0.1%甲酸 水溶液和0.1%甲酸 甲醇溶液为流动相等度洗脱,电喷雾（ESI）正离子模式、多反应监测模式（MRM）下检测,内标法定量。结果：UPLC MS/MS检测血清维生素A、α 维生素E、β 维生素E线性关系良好,相关系数分别为0.999 3、0.999 3、0.999 7;维生素A、α 维生素E、β 维生素E定量限分别为0.213、0.240、0.070 ng/mL,检出限分别为0.064、0.072、0.021 ng/mL;维生素A、E在低、高浓度加标回收率范围分别为89.7~107.4、97.6~118.1,RSD分别为2.45%~3.43%、1.48%~5.40%。结论：本研究建立的人血清维生素A、E超高效液相色谱 串联质谱法灵敏度高、准确稳定、重现性好,对血清中维生素 A 和维生素 E 的测定具很好的的应用价值。     

转AO基因高植酸酶玉米营养学评价分析

目的：评价转AO基因高植酸酶玉米的主要营养学价值。方法：以国标法测定转基因玉米及其亲本的主要营养成分。选择断乳SD大鼠100只随机分为5组,饲养28d。对5组大鼠饲养前、后主要营养学指标、血液和生化学指标,以及蛋白质功效比值（PER）进行比较。 结果：转AO基因高植酸酶玉米与非转基因对照玉米在主要营养成分方面均有相似性。各试验组大鼠的平均增重和平均日增重量均显著高于对照组（P<0.05）,且A组的平均增重亦显著高于B组（P<0.05）。雄性试验组和雌性A、B组的WBC计数显著低于对照组（P<0.05）,雄性B、D组的AST,以及A组的CRE均显著高于对照组（P<0.05）,雄性C组的AST显著低于D组（P<0.05）。所有试验组的PER均显著低于对照组（P<0.05）,转基因玉米与对照玉米在PER和校正PER方面均无统计学差异（P>0.05）。 结论：转AO基因高植酸酶玉米在蛋白质营养价值方面与非转基因玉米具有实质等同性,从营养学角度分析该类型玉米是安全的。