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萜类化合物种类繁多,生物活性多样,在食品、药品与化妆品等行业中具有广泛的应用。萜类化合物多来源于植物,然而随着合成生物学的快速发展,相较于传统的天然植物提取与化学合成方法,利用工程微生物进行萜类化合物异源合成的方法显得更为经济与环保。萜类合成酶的催化活性及合成产物的结构特性是萜类化合物异源合成的关键。通过蛋白定向进化与理性设计可以有针对性地优化萜类合成酶的催化性能及产物专一性,但该方案需要一个特异的筛选方法来实现蛋白突变体库的高通量筛选。近年来,一系列高通量筛选方法的建立使得萜类合成酶的筛选变得更加灵敏与高效。本文对近期建立的萜类合成酶高通量筛选方法进行了综述,简要概述了各种筛选方法的基本原理与优缺点,并对高通量筛选技术在萜类合成酶改造中的应用做出了展望。 相似文献
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目的:为更深入了解α-硫辛酸如何影响复杂信号通路间的相互作用抑制细胞增殖。方法:我们凭借RNA-Seq与同位素相对标记与绝对定量技术,对α-LA处理24 h HepG2细胞在转录和蛋白表达水平的变化差异进行分析,并借助实时定量PCR免疫印迹技术对组学数据进行了鉴定。结果:转录组学提示共有4,446个基因(2,097个基因表达下调,2,349个基因表达上调)的表达在α-LA处理24 h后呈现显著性改变。GO分析提示,编码肿瘤相关细胞膜蛋白的基因是受α-LA影响最为显著的一类mRNA;蛋白质组学进一步提示Grb2可能是受α-LA调控的膜受体信号通路中关键的靶分子。结论:α-LA抑制HCC细胞增殖是通过下调Grb2介导的相关通路而实现。 相似文献
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目的:探讨α-LA对A549细胞增殖的机制以及Grb2在其中发挥的作用。方法:利用CCK-8和流式细胞术检测α-LA对细胞增殖的影响;实时定量PCR和Western Blot检测细胞中Grb2表达的变化;利用向细胞中转染siGrb2及过表达Grb2载体检测细胞中Grb2表达水平差异对细胞增殖的影响。结果:α-LA处理A549 24 h后,对照组和α-LA处理组中位于G_0/G_1期细胞的比率由40.60%上升至57.80%;而位于S期细胞的比率由45.96%下降至39.01%;与细胞G1/S期的转换相关的调节蛋白CDK2/4/6,cyclin D3和E1的表达也随之发生了相应的改变,α-LA通过抑制细胞G_1/S期的转换而抑制细胞增殖。与亲本细胞相比,Grb2在α-LA处理A549细胞中的转录和蛋白表达水平均显著降低,干扰细胞中Grb2表达能显著抑制A549增殖;而过表达Grb2可阻断α-LA诱导的细胞增殖抑制。结论:α-LA具有抑制A549细胞增殖的作用,Grb2是α-LA发挥抑细胞增殖效应的重要介导因子。 相似文献
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根据2001至2015年对云南省30个县(市)的现场调查,本文对短尾鼩(Anourosorex squamipes)体表螨类(革螨和恙螨)的感染状况和相关生态规律进行了初步分析。常规统计短尾鼩体表螨类的构成比(C_r)、感染率(P_M)、平均多度(M_A)和感染度(M_I)。用Jaccard相似性系数(J)比较螨类物种相似度。用Margalef指数(M_f)测定螨类物种丰富度,同时计算螨类科属级物种多样性(D_F、D_G、D_(G-F))。用聚块指数(m*/m)和负二项分布的K参数(k)测定优势螨种的空间分布型。用协调系数(V)测定革螨和恙螨两大类群之间的协调关系。在所调查的30个县市中,从10个县市累积捕获到348只短尾鼩,采集到螨类15541只,分类鉴定为10科24属103种,恙螨物种丰富度(M_f)高于革螨,但革螨科属物种多样性各指标(D_G=2.80,D_F=2.32,D__(G-F)=0.17)均高于恙螨的相应指标(D_G=1.43,D_F=1.26,D_(G-F)=0.12)。短尾鼩体表螨类感染普遍,总感染率(P_M=80.75%)、总平均多度(M_A=44.66螨/鼩)和总感染度(M_I=55.31螨/鼩)均较高,革螨的这三项指标明显高于恙螨(P_M:χ~2=182.580,P 0.001;M_A:Z=-12.495,P 0.001;M_I:Z=-0.371,P 0.05)。两大螨类之间呈较低程度正协调(V=0.18,P 0.001)。短尾鼩地厉螨(Dipolaelaps anourosorecis)是短尾鼩体表的优势革螨(C_r=92.79%),密点纤恙螨(Leptotrombidium densipunctatum)是优势恙螨(C_r=23.10%),两种优势螨种在短尾鼩不同个体间呈聚集分布(m*/m 1,k 0)。不同性别和不同年龄短尾鼩体表螨类感染存在差异,螨类更倾向于感染雌性和成年短尾鼩。雌雄短尾鼩体表恙螨种类相似度较低(J=0.31),革螨种类相似度相对较高(J=0.65)。不同年龄短尾鼩体表恙螨种类相似度很低(J=0.17),革螨种类相似度也较低(J=0.28)。结果表明,云南省短尾鼩体表螨类感染普遍,感染程度重,螨类物种多样性很高。密点纤恙螨是优势恙螨,短尾鼩地厉螨是优势革螨,两种优势螨种均呈聚集分布。不同性别和不同年龄短尾鼩体表螨类感染存在性别偏倚和年龄偏倚。 相似文献
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