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[目的]探讨脂质体介导基因编辑载体质粒转染人食管癌Eca-109细胞的最佳条件。[方法]以基于Cre/Lox P系统的p GT-A1B1和基于CRISPR/Cas9系统的p X458-sgRNA8两种基因编辑载体质粒为实验材料,将环状和线性质粒以不同DNA用量(0. 2、0. 4、0. 6和0. 8μg)和不同DNA与脂质体比例(1∶1、1∶1. 5、1∶2、1∶2. 5和1∶3)转染Eca-109细胞,计算转染效率。[结果]不同DNA用量条件下,p GT-A1B1在0. 4μg和0. 6μg时转染效率较高,p X458-sgRNA8在0. 6μg时转染效率较高,与其它DNA用量比较均有显著性差异(P 0. 05)。不同DNA与脂质体比例条件下,p GT-A1B1在比例为1∶1. 5和1∶2时转染效率较高,p X458-sgRNA8在比例为1∶2. 5时转染效率较高,与其它比例比较均有显著性差异(P 0. 05)。同一种质粒的环状和线性结构形态,在DNA用量或DNA与脂质体比例相同时,转染效率差异不显著(P 0. 05)。[结论]建立了脂质体介导基因编辑载体质粒转染Eca-109细胞的最佳转染条件,质粒p GT-A1B1和p X458-sgRNA8的DNA用量分别为0. 4～0. 6μg和0. 6μg,DNA与脂质体比例分别为1∶1. 5～1∶2和1∶2. 5。 相似文献
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转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)是一种多功能的细胞因子,能够调控细胞增殖、分化、黏附、迁移及凋亡等行为,在胚胎发育过程和成体组织稳态维持中发挥重要的作用。而在许多疾病状态下,特别是在癌症中,TGF-β不仅能够影响肿瘤细胞的增殖与转移,其对于肿瘤微环境的调控与塑造也受到越来越多的关注。肿瘤微环境是指肿瘤在发生和发展过程中所处的内环境,由肿瘤细胞本身、相邻正常组织中的间质细胞,以及这些细胞所释放的众多细胞因子等共同组成。肿瘤微环境是肿瘤发展的重要机制,也是肿瘤临床治疗领域亟待探索的关键问题。TGF-β是调节肿瘤微环境组成和功能的主要参与者之一。在本综述中,将着重讨论TGF-β对于肿瘤微环境中的免疫监视机制及肿瘤细胞外基质的主要影响。即TGF-β对于构成先天性和获得性抗肿瘤免疫应答的各种类群的免疫细胞具有广泛的调控作用,从而削弱宿主的肿瘤免疫监视功能。同时,TGF-β通过促进肿瘤相关成纤维细胞的产生,以及肿瘤细胞外基质的纤维化,有助于肿瘤的恶变和转移。此外,还介绍了通过阻断肿瘤微环境中TGF-β信号通路进行肿瘤治疗的主要策略及独特优势。而未来进一步解析TGF-β信号在肿瘤微环境中的复杂调控作用,并建立有效的靶向干预方法对于开发高效的抗肿瘤药物具有重要的意义。 相似文献
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COX7A2L是一个线粒体呼吸链复合体IVCOX7A2亚基的类似蛋白。已知COX7A2L蛋白能够影响小鼠线粒体的功能,然而,关于该蛋白在哺乳动物细胞中功能亚型的分布及其如何影响线粒体的功能仍不清楚。为了明确COX7A2L蛋白在人源细胞中的表达类型及功能,该文初步分析了COX7A2L在人体细胞中亚型的表达情况及其对线粒体功能和超级复合体组装的影响。该文利用细胞生物学及分子生物学技术,发现COX7A2L在人体细胞中以单一亚型的形式表达并定位于线粒体内膜。研究者对96个中国人COX7A2L基因的测序分析后发现,COX7A2L基因的外显子上不存在任何多态性位点,提示COX7A2L基因序列以及功能在人群中高度保守。通过线粒体功能实验分析我们发现,COX7A2L基因敲除导致细胞线粒体呼吸功能减弱,ATP含量减少。随后的研究发现,人源COX7A2L同小鼠长亚型COX7A2L基因一样能够抑制超级复合体III+IV的组装,但是与小鼠COX7A2L长亚型不同的是,人源COX7A2L的基因敲除能够降低但不能完全去除超级复合体I+III+IV的含量,并且超级复合体III+IV的组装受到的影响远大于超级复合体I+III+IV。这提示,超级复合体I+III+IV的组装不完全依赖于COX7A2L蛋白的表达。综上所述,人源COX7A2L基因虽然对线粒体功能的影响类似于小鼠的长亚型COX7A2L,但是人源COX7A2L基因更保守,并且其对呼吸链超级复合体的影响不同于对应的鼠源基因。 相似文献
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微RNA(microRNA,miRNA)是一类内源性非编码小RNA,在细胞增殖、分化及凋亡等生物过程中发挥重要调节作用，其异常表达与多种疾病的发生发展密切相关。因此，对特定miRNA进行精准检测，有助于疾病的早期诊断与及时治疗。核酸生物传感器凭借化学性质稳定、设计简单、可编程性及易修饰等优点受到广泛关注。其中，G-四链体功能性核酸是一种富含鸟嘌呤的DNA通过Hoogsteen型氢键形成的特殊空间结构，因其可通过范德华力及疏水作用等相互作用力与卟啉、染料和氯化血红素(hemin)等小分子结合并增强其理化性质，而广泛应用于miRNA检测领域。目前，G-四链体常与核酸扩增或纳米信号放大技术联用以提高灵敏度，既可用于目标识别，又可辅助信号输出。本文首先介绍了G-四链体的结构及其荧光增强及过氧化物酶活性提升的机制；其次，依据上述特性分别论述了G-四链体与荧光配体结合构建miRNA荧光生物传感器的研究进展，以及基于G-四链体/Hemin的miRNA生物传感平台，在比色、电化学及化学发光检测中的应用进展；最后讨论G-四链体在miRNA检测领域所面临的挑战，并展望未来发展趋势，以期促进高灵敏度及特异性... 相似文献
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