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酵母被广泛用于分子生物学中基因功能的检测。为扩大酵母株系UCC419在抑制基因活性检测方面的应用,本研究通过向UCC419株系中导入用特殊引物扩增出的包含标记基因TRP1的PCR片段,利用同源重组将UCC419中的筛选标记基因LEU2敲除,并同时插入TRP1,新建立的株系命名为UCC419m（m：modi-fied）。UCC419m为TRP1筛选、leu2突变型菌株,其它基因型均同UCC419。给UCC419m中转入携带LEU2的质粒pDEST32检测是否能恢复其表现型,同时转入不携带LEU2的质粒pDEST22作为阴性对照,将转化子在不含LEU2与URA3的培养基中培养,结果显示,携带LEU2质粒pDEST32的转化子能够在LEU2与URA3缺陷型培养基上正常生长,而不携带LEU2质粒pDEST22的转化子不能生长。本研究结果表明,成功建立了一种适用于基于Invitrogen载体的抑制基因活性检测或从文库中筛选抑制基因的酵母菌株。 相似文献
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中国野生毛葡萄钙调蛋白基因克隆及序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
于葡萄黑痘病发病盛期,用病叶压片法对高抗黑痘病的中国野生毛葡萄'商-24'接种黑痘病病原菌,采用mRNA差异显示技术进行抗黑痘病基因表达差异的研究.结果显示:(1)获得了T11GG/B0304-400、T11CC/S428-350、T11GG/S424-700、T11AG/S432-350、T11GG/S433-250、T11GG/S433-300、T11AG/S432-300、T11GG/S438-353和T11AG/S424-300等9个基因表达差异cDNA片段.其中T11GG/S438-353 mRNA片段表达在接种后3 d被诱导显著降低,并在之后2 d几乎检测不到.(2)采用RACE技术克隆了T11GG/S438-353 mRNA片段的cDNA全长序列;序列分析表明,该cDNA包含一个607 bp完整的开放阅读框架,编码149个氨基酸;其编码氨基酸序列与拟南芥、欧洲葡萄、柳杉、党参、无梗花栎、欧洲栗及寄生草钙调蛋白的一致性分别为99%、97%、94%、91%、90%、88%和77%.(3)本实验克隆到了负向调控中国野生毛葡萄抗黑痘病的钙调蛋白基因,并命名为VqCaM,其GenBank登录号为EU694099;实时荧光定量PCR结果再次验证VqCaM表达受葡萄黑痘病侵染下调, 相似文献
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