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为了获得原抗HFRSV衣壳蛋白McAbF3^1株轻链可变区基因,由连接肽体外连接获得单链抗体基因,在大肠杆菌中表达,从鼠源抗HFRSV衣壳蛋白McAbF3株细胞中分离总RNA,以oligo(dT)18为引物逆转录成cDNA,通过PCR扩增出抗体的轻链(VL)和重链可变区(V11)基因,由连接本外连接获得单链抗体(SeFv)基因。将此单链抗体(SeFv)基因插入原核表达载体PET28a,经大肠杆菌( 相似文献
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鼠抗HFRSV衣壳蛋白McAb F3株可变区基因的获取及特性分析 总被引:1,自引:0,他引:1
培养鼠抗肾综合征出血热病毒衣壳蛋白F3杂交瘤细胞株,提取总RNA,根据鼠源IgG抗体基因家族可变区基因碱基序列的特点,设计简并引物,通过逆转录聚合酶链反应,获得抗体轻链可变区和重链可变区基因。分别将其克隆入载体PT7BlueT Vector,选取阳性重组克隆各两个,分别测定了所载重链可变区和轻链可变区基因的碱基序列,比较了不同克隆轻链可变区基因之间和重链可变区基因之间碱基序列的差异;分析了各自的氨基酸框架及其对应蛋白的亲水性。结果显示,两个重链可变区基因碱基序列有4处不同,同源性为979%;其中重组克隆ZG364 5F所载重链可变区基因有完整的开放阅读框架,对应的蛋白含有丰富的亲水基因,第112氨基酸处亲水性最高;另一重组克隆ZG364 4F所载重链可变区基因不能通读。两个轻链基因碱基序列有4处不同,同源性为991%,重组克隆ZG365 5F和ZG365 7F所载轻链可变区基因均有完整的开放阅读框架,对应的蛋白均含有丰富的亲水基因,ZG365 5F所载基因对应蛋白第67氨基酸亲水性最高,ZG365 7F所载基因对应蛋白第34氨基酸亲水性最高。 相似文献
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