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目的构建和鉴定HAX1和EGFP双基因共表达重组腺病毒载体。方法采用DNA重组技术,将目的基因HAX1克隆至含有报告基因EGFP的穿梭质粒pAdTrack—CMV中,并转化于大肠埃希菌DH5a;筛选出重组质粒pAdTrack—CMV—HAX1,并在BJ5183细菌中与pAdEasy-1质粒进行同源重组,产生重组腺病毒载体;用lipofectamine将其转染HEK293细胞,包装携带全长HAX1的重组复制缺陷型腺病毒pad—HAX1-EGFP,酶切和序列测定鉴定;用制备好的Ad—HAX1-EGFP感染HEK293细胞,流式细胞术检测其感染效率,RT—PCR、Western印迹鉴定外源基因HAX1的表达。BrdU检测感染了Ad—HAX1-EGFP的HEK293细胞增殖情况。结果pAdTrack—CMV—HAX1重组质粒构建成功。pAdTrack—CMV—HAX1质粒与pAdEasy-1质粒同源重组后与预期结果相符。构建好的Ad—HAX1-EGFP能有效感染HEK293细胞;外源基因能在239细胞中有效表达。HAX1高表达的HEK293细胞其增殖率得以提高。结论成功构建了表达HAX1和EGFP共表达的重组腺病毒载体,HAX1能够促进结肠癌细胞HEK293细胞的增殖。 相似文献
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为了探索烟草生产发展的新途径,在不影响烟叶产量和品质的前提下,充分发挥土地增产潜力,获得烟叶、粮食双丰收。1996年我们经调查研究后,在烟田套种甘薯,试验结果效益显著,烟叶亩产176公斤,产值达1659元,上、中等烟占80％以上。甘薯亩产达2870公斤,产值达1722元。烟叶和甘薯总产值达3381元。其主要栽培技术如下：冬季深耕起拉施肥我县地处豫西丘陵旱区,冬季缺雪少雨,夏季干旱,秋季雨涝。特别在5－6月份,正值烟叶旺长期,为全年干旱时期。因此,烟薯套种,必须立足抗旱保墒,做到秋雨春用。烟田冬前要深耕,亩施农肥200O－2500… 相似文献
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