IAP家族抑制衰老的骨髓间充质干细胞的凋亡

目的:探讨衰老的大鼠骨髓间充质干细胞凋亡抗性是否增加且是否通过凋亡抑制蛋白(IAP)家族介导。方法:用DMEM/F12中加入10%胎牛血清(FBS)的完全培养基培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)至第三代,使用D-半乳糖(D-gal)诱导成衰老的BMSC并用β-半乳糖苷酶染色做衰老鉴定。用肿瘤坏死因子α(TNF-α)和环己酰亚胺(CHX)共同处理正常对照组与衰老组的BMSC,通过贴壁细胞计数统计其生存率,并通过蛋白印迹法检测两组细胞中Cleaved PARP、Cleaved Caspase3蛋白、IAP家族成员c-IAP1、c-IAP2、XIAP以及衰老相关标志蛋白的水平。再用IAP抑制剂AT-406处理衰老的细胞,CCK-8检测处理组以及未处理组细胞的细胞活力。最后用凋亡抑制剂z-VAD-fmk和AT-406共同处理正常对照组与衰老组细胞,观察z-VAD-fmk能否减少IAP蛋白被抑制后所引起的细胞死亡。结果:与正常对照组相比,衰老的BMSC中由TNF-α和CHX共同诱导引起的细胞死亡数明显减少,凋亡标志物Cleaved PARP和Cleaved Caspase3蛋白的水平降低,而IAP家族成员c-IAP1、c-IAP2和XIAP的蛋白水平升高。用AT-406处理衰老BMSC后细胞的死亡数明显高于未处理的衰老BMSC组,通过z-VAD-fmk抑制凋亡通路后,AT-406处理的衰老细胞的死亡数减少。结论:衰老BMSC通过升高IAP家族蛋白水平从而提高对凋亡的抵抗能力。     

骨髓基质细胞与交联明胶-聚羟基丁酸酯膜的生物相容性研究

目的研究生物材料交联明胶-聚羟基丁酸酯膜与骨髓基质细胞的生物相容性,探讨新型材料在骨组织工程中的应用前景。方法体外培养兔骨髓基质细胞,分别接种于G-PHB(交联明胶-聚羟基丁酸酯)、PHB(聚羟基丁酸酯)和G(交联明胶)材料膜片。采用MTT法检测细胞增殖活性,体视学方法检测细胞粘附能力,荧光双染法检测细胞完整性,扫描电镜观察细胞-材料界面。结果MTT检测发现G-PHB组增殖活性最强,而且表现为最佳的细胞粘附特性,与对照组比较差异有显著性意义。各组细胞完整性分析没有发现显著性差异。扫描电镜观察显示,G-PHB组细胞粘附及铺展良好,优于其他各组。结论交联后的生物降解膜材料G-PHB与BMSCs细胞的体外相容性明显优于单纯膜材料PHB和明胶,在骨组织工程学领域具有良好的研究价值和应用潜力。     

蒙花苷消除衰老骨髓间充质干细胞的衰老表型发挥抗衰老作用

目的:探讨蒙花苷(Linarin,LR)是否可以消除衰老骨髓间充质干细胞(BMSC)的衰老表型发挥抗衰老作用。方法:取4周龄80 g-100 g的雄性SD大鼠大腿骨髓腔内的骨髓间充质干细胞,用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养至三代,使用D-gal诱导骨髓间充质干细胞衰老,使用SA-β-gal染色、活性氧检测、蛋白免疫印迹验证骨髓间充质干细胞细胞衰老状态,通过蛋白免疫印迹检测衰老BMSC与正常BMSC中细胞保护性蛋白sirt1、sirt6及衰老相关蛋白p16、p21、p53的表达水平。之后,我们通过不同浓度LR处理衰老骨髓间充质干细胞。最后,通过蛋白印迹分析检测未处理组与LR处理组衰老相关蛋白表达情况。观察蒙花苷能否可以消除衰老的大鼠骨髓间充质干细胞衰老表型。结果:衰老的骨髓间充质干细胞细胞保护性蛋白sirt1、sirt6降低及衰老相关蛋白p16、p21、p53明显增高,衰老细胞中与DNA损伤相关的细胞核内蛋白γ-H2AX表达明显增加。而蒙花苷处理后,衰老细胞组衰老相关蛋白p16、p21、p53明显降低,γ-H2AX蛋白阳性细胞明显减少。结论:蒙花苷可以剂量依赖性的消除衰老的大鼠骨髓间充质干细胞的衰老表型发挥抗衰老作用。     

早期激素性股骨头坏死模型的建立

目的:建立早期股骨头坏死模型,为研究其发病机制及合理治疗方法的提供可靠的模型基础。方法:用单一剂量脂多糖LPS(10μg/kg)联合三次甲强龙MPS(10 mg/kg)注射,每次间隔24h,诱导建立兔早期股骨头坏死模型,通过影像学及组织病理性学方法评估模型建立情况。结果:4周后,模型组死亡1例,模型组16例X线检查未见异常表现,2例X线提示股骨头密度不均,未出现股骨头塌陷,18例HE染色示骨细胞空骨陷窝增多,脂肪细胞体积变大,数量增多。结论:用脂多糖(LPS)联合甲强龙可成功诱导建立兔早期股骨头坏死模型,模型成功率高、死亡率低。