赭曲霉毒素 A 的高灵敏时间分辨荧光免疫分析

采用时间分辨荧光免疫分析 (TRFIA) 技术建立快速的高灵敏度的赭曲霉毒素 A (OTA) 全自动检测方法 . 将 OTA-BSA 作为免疫分子免疫 Balb/c 小鼠, OTA-KLH 为筛选用抗原包被板,用间接酶联免疫分析 (ELISA) 法筛选出专一针对 OTA 的高效价的阳性克隆 3G9 ,用杂交瘤细胞制备抗 OTA 单克隆抗体 . 用 OTA-BSA 包被 96 孔板为固相抗原,与游离 OTA 共同竞争有限的抗 OTA 单克隆抗体,以稀土离子 Eu3+ 标记的羊抗鼠抗体进行示踪,采用间接竞争免疫分析方法在解离增强荧光免疫分析体系中建立 OTA-TRFIA. 该方法的灵敏度为 0.03 μg /L ,测量范围为 0.03 ~1 000 μg /L ,批内和批间变异分别为 3.7% 和 5.3% ,平均回收率为 94.2% ,与赭曲霉毒素 B 的平均交叉反应为 3.7% ,与黄曲霉毒素 B1 、 牛血清白蛋白和苯基丙氨酸无交叉反应,说明抗体的特异性很好 . 8 条不同时间进行的间接竞争 OTA-TRFIA 的效应点均值 ED80 、 ED50 、 ED20 分别为 (0.33±0.02) μg /L、 (1.44 ±0.08) μg /L 和 (5.22 ± 0.12) μg /L ,说明方法的稳定性好,样品经 TRFIA 和 ELISA 试剂盒同时检测 OTA ,两者的相关系数为 0.925 ,结果相符 . 研究表明, OTA-TRFIA 是目前报道的 OTA 检测中最灵敏的方法,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景 .