酵母基因中断技术

酵母基因中断技术是研究酵母基因功能的重要手段,自80年代初诞生以来经历了不断的改进和发展.PCR介导的酵母基因中断技术,大大简化了操作,实现了酵母基因的精确缺失;酵母基因的多重中断技术,可在酵母内实现多个基因的中断;可进行大规模基因中断和功能分析的酵母基因中断技术,适应了在酵母全基因组测序完成的情况下进行功能基因组学研究的要求.酵母基因中断技术对人类基因功能研究也有很大启示作用.     

RIOK3促进了caspase-10对PAK2的酶解激活

RIO3为非典型激酶RIO家族的成员之一,仅在多细胞真核生物中出现,为研究RIOK3蛋白的功能,以其作为诱饵蛋白对成人肝cDNA文库进行酵母双杂交筛选,得到其相互作用蛋白PAK2,并通过细胞内免疫共沉淀和免疫荧光共定位实验验证了该相互作用。实时定量PCR和免疫印迹检测结果显示,RIOK3能够在蛋白水平上降低PAK2表达量。通过CCK-8和细胞凋亡检测,发现二者共表达可以抑制增殖并促进凋亡,并且这一促凋亡效应可以被caspase-10的无酶活最短剪切本caspase-10G所抑制。实验结果显示,RIOK3可能促进了caspase-10对PAK2的酶解,在PAK2的酶解激活途径中发挥重要作用。     

绿色荧光蛋白GFP基因与新生隐球菌荚膜基因的融合表达系统

目的构建新生隐球菌荚膜基因与绿色荧光蛋白的融合表达系统。方法PCR法扩增CAP60基因片段,测序验证其准确性。将其与多个必需基因共同连人穿梭质粒。结果获得6150bps大小的质粒,该质粒含有荚膜基因启动子、终止子及荧光蛋白的基因。结论将新生隐球菌荚膜基因与荧光蛋白基因融合表达,将会有利于对荚膜的生化合成途径作进一步研究。     

人SSX2IP与14-3-3η蛋白相互作用研究

人类SSX2IP是SSX2蛋白的相互作用蛋白,它与肿瘤的发生、发展有着密切的相关性。为进一步阐明人类SSX2IP蛋白的潜在功能,以其作为诱饵蛋白对成人肝cDNA文库进行酵母双杂交筛选,结果筛到了SSX2IP的一个新相互作用蛋白14-3-3η。利用GSTPull-down实验和细胞内免疫共沉淀实验在体内外验证了该相互作用的真实性。通过免疫荧光共定位实验发现SSX2IP和14-3-3η共表达于HeLa细胞时,它们共定位于胞质及核周。利用CCK-8法检测SSX2IP和14-3-3η对HEK293T细胞增殖的影响,发现共转染SSX2IP和14-3-3η后,HEK293T细胞的增殖速度有所提高。这些结果为进一步深入研究SSX2IP与14-3-3η的相互作用及其生物学功能提供新的线索。     

不同光质LED弱光对樱桃番茄植株形态和光合性能的影响

基于新型LED光源研究了不同光质弱光对樱桃番茄植株形态和光合性能的影响.结果显示:(1)红蓝光(RB)的基础上添加不同的光色处理,对植株的形态没有显著影响,但对植株生物量有显著影响,能调节生物量的分配.除红蓝黄绿紫复合光处理(Z)外,其他复合光处理的单株总生物量都大于RB处理,添加绿光、黄光、紫光和黄紫光有利于植株地上部的生长,而添加绿光和紫光却抑制植株地下部的生长.(2)除红蓝黄紫复合光(RBYP)和红蓝紫复合光(RBP)处理外,所有处理的光合色素含量都比RB处理高,并以Z处理光合色素含量最高.(3)叶片的光补偿点和表观量子效率以及净光合速率受光质的调控.RBYP处理的最大净光合速率和表观量子效率显著大于其他处理,光补偿点在红蓝绿复合光(RBG)和红蓝黄复合光(RBY)下较大,而在白光(CK)和Z处理下较小.(4)各处理光系统Ⅱ的光能分配存在差异,RB处理光化学淬灭系数较其他处理小,而Z和RBP的非光化学淬灭系数较小,各处理间最大光化学效率及电子传递速率无显著差异.研究发现,复合光质的光色间对植株生长发育的影响是相互协同、相互制约的关系;红蓝黄紫复合光处理植株光合潜能较大,能够在一定程度上缓解红蓝弱光胁迫,促进植株幼苗生长;在红蓝光基础上添加其他光色有利于植株光合色素的积累并促进光合,同时可提高植株光化学效率.     

多元化教学模式在烧伤外科研究生教学中的应用

目的:探讨LBL、PBL与CBL相结合的多元化教学模式在烧伤外科研究生临床教学中的效果。方法:研究对象为我院烧伤外科硕士研究生48人,随机分为A、B、C三组,A组采用传统的LBL+CBL模式进行教学,B组采用CBL+PBL模式进行教学,C组采用LBL+CBL+PBL模式进行教学,通过问卷调查和试卷考核两方面比较教学效果。结果:通过问卷调查,C组学生在对教学的满意度、学习主动性、学习兴趣、知识量和解决问题能力方面显著高于A组,在知识量和解决问题能力方面显著高于B组,B组学生在对教学的满意度、学习主动性和解决问题能力显著高于A组;通过试卷考核,C组学生在理论考核和临床思维考核方面显著高于A组,在理论考核方面显著高于B组,B组学生在理论考核方面显著低于A组。结论:PBL教学法还不能完全替代LBL教学法,而LBL、PBL与CBL结合的教学法在各个方面均优于传统教学,有助于提高临床能力。     

Sibp：KM小鼠的生长繁殖及其若干生物学特性研究

本文按国际上远交群小鼠的遗传监测和控制的要求,对Ｓｉｂｐ：ＫＭ小鼠进行育种繁殖、遗传背景和生物学特性等多方面的研究。统计分析该小鼠繁殖性能,绘制了生长曲线。测定２４个生化标志基因位点,其中１１个位点呈多态型,平均杂合率为０．２０９。该小鼠下颌骨形态分析的部分判别函数值（占４４％）超过均值±２ＳＤ,呈弥散分布。该小鼠Ｈ－２组织相容合体,具有１０种Ｉ类私有抗原,１７种表现型。此外还测定该小鼠形态数据、部分血液学数据和整体分析,为Ｓｉｂｐ：ＫＭ小鼠推广应用提供技术数据。     

MIP与NFκB关键调节因子NEMO相互作用的初步研究

人类基因MIP是一个2000年克隆得到的抑癌基因。已有研究表明它可以与FASP1、MafF等多个蛋白相互作用,具有参与信号传导、调节基因转录等功能。有关MIP抑制某些肿瘤细胞生长的确切机制目前还不明确。本研究首先以MIP为诱饵基因对人胎盘cDNA文库进行了酵母双杂交筛选,发现了一个新的MIP相互作用蛋白片段——NFκB关键调节因子NEMO（NFκB essential modifier）蛋白的部分片段,     

乳酸克鲁维酵母高拷贝整合载体的构建及应用

用酿酒酵母２６ｓ ｒＤＮＡ作探针克隆乳酸克鲁维酵母Ｋ．ｌａｃｔｉｓ ２．２ｋｂ ｒＤＮＡ片段,对其作限制内切酶图谱分析。以该基因片段为同源整合的靶顺序,酿酒酵 ＵＲＡ３基因为选择标记构载体质粒ｐＩＲＫ并对其在宿主Ｋ．ｌａｃｔｉｓ ＭＷ９８－８ｃ细胞中的整合位点,拷数及稳定性进行测定和分析。     

光质对番茄和莴苣幼苗生长及叶绿体超微结构的影响

采用发光二极管(LED)精确调制不同光谱能量分布,以荧光灯光照为对照,研究光质对番茄和莴苣幼苗生长及叶绿体超微结构的影响.结果表明：红光下番茄、莴苣幼苗的可溶性糖、淀粉和碳水化合物含量均显著高于对照,叶片叶绿体中淀粉粒膨大显著;蓝光极显著抑制了番茄下胚轴伸长,显著提高了莴苣和番茄幼苗叶片叶绿素a和类胡萝卜素含量;红蓝光下莴苣幼苗叶片的可溶性糖、淀粉、碳水化合物、蔗糖含量和C/N均达到最大值且显著高于红光处理,番茄和莴苣幼苗的主根显著伸长,幼苗叶片中叶绿体形态正常,基粒增多,基质片层清晰,淀粉粒体积明显小于红光处理.光质对植物幼苗的光形态建成、生长、碳氮代谢及叶绿体发育有显著影响;红光下光合产物积累显著但运输受阻严重,在红光中添加适量蓝光更有利于莴苣幼苗的碳水化合物积累,并可促进幼苗根系生长,有利于同化产物输出.