PPENK-MIDGE-NLS基因载体的构建及其在活体大鼠的表达

增加体内免疫细胞合成分泌内源性阿片肽,可对心肌缺血再灌注损伤产生保护作用。基因治疗是增加内源性脑啡肽(Enkephalin,ENK)的一种有前景的研究方向,但是以往的病毒、质粒等载体受到其自身免疫原性的限制并存在基因重组、原癌基因激活、抗细菌蛋白抗体产生以及基因表达改变等诸多问题。本研究采用非病毒、非质粒的微量免疫原定义的基因表达(Minimalistic immunological defined gene expression,MIDGE)方法构建前脑啡肽原(Preproenkephalin,PPENK)PPENK-MIDGE-NLS基因载体能克服病毒和质粒载体的上述缺点。用PCR技术扩增大鼠前脑啡肽原(Preproenkephalin,PPENK)外显基因,产物插入p EGFP-N1质粒,双酶切质粒获得包含启动子、目的基因、RNA稳定序列的线性载体,两端以不受外切酶作用的发夹样脱氧寡核苷酸序列(Oligodesoxynucleotides,ODNs)封闭。为保证载体的入核和表达效率,载体的一端连接了核定位序列(Nuclear localization sequence,NLS)。流式细胞术和激光共聚焦检测其转染效率,Western blotting检测组织内前脑啡肽蛋白的表达。结果显示,PPENK-MIDGE-NLS能够转染大鼠活体细胞并表达前脑啡肽蛋白,增加载体的量能够在一定范围内提高转染效率。研究结果表明该载体可能成为预防和治疗心肌缺血再灌注损伤的新方法。     

血清LXA4联合MMP-9预测脓毒症患者发生多器官功能障碍综合征的临床研究

摘要 目的：探讨血清脂氧素A4（LXA4）联合基质金属蛋白酶-9（MMP-9）对脓毒症患者发生多器官功能障碍综合征（MODS）的预测价值。方法：选择2020年1月-2023年1月期间中国人民解放军空军军医大学第二附属医院接受治疗的140例脓毒症患者作为研究对象。根据患者入院28 d内是否发生MODS将其分为MODS组（n=41）和非MODS组（n=99）。检测并对比两组血清LXA4、MMP-9水平。采用单因素及多因素Logistic回归模型分析脓毒症患者发生MODS的影响因素。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清LXA4、MMP-9对脓毒症患者发生MODS的预测价值。结果：本次纳入的140例脓毒症患者，入院28 d内共有41例发生MODS，发生率为29.29%（41/140）。MODS组血清LXA4水平低于非MODS组，MMP-9水平高于非MODS组（P<0.05）。单因素分析结果显示：脓毒症患者发生MODS与合并高血压、脓毒症病程、存在休克、年龄、合并糖尿病、存在细菌感染、APACHE II评分、疾病严重程度、SOFA评分、存在低血钙、PCT有关（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示：年龄偏大、MMP-9偏高、脓毒症病程偏长、LXA4偏低、APACHE II评分偏高、PCT偏高、SOFA评分偏高、存在休克、合并糖尿病、存在低血钙、合并高血压、疾病严重程度为危重、存在细菌感染均是脓毒症患者发生MODS的危险因素（P<0.05）。血清LXA4、MMP-9单独及联合检测预测脓毒症患者发生MODS的曲线下面积（AUC）分别为0.815、0.821和0.898，联合检测的效能优于单独检测。结论：脓毒症并发MODS患者血清LXA4下降，MMP-9升高，二者联合检测对脓毒症并发MODS中具有较好的预测价值。年龄、休克、脓毒症病程、低血钙、APACHE II评分、疾病严重程度、SOFA评分、细菌感染、合并糖尿病、PCT、LXA4、MMP-9、合并高血压均是脓毒症患者发生MODS的影响因素。