敲低EDAG加强NPM1蛋白的降解并增加AML病人对药物的敏感性

Nucleophosmin (NPM1或B23.1)是在细胞核内广泛表达的蛋白磷酸酶,在多方面发挥重要作用,如核糖体合成、中心体复制、细胞周期控制、细胞增殖及转化．NPM1是急性粒细胞白血病(acute myeloid leukemia, AML)中最常见的突变基因之一．红系分化相关基因(erythroid differentiation associated gene, EDAG)是在造血组织特异表达的基因,在造血细胞的增殖与谱系分化调节方面发挥重要作用．在AML病人中,高表达的EDAG与较差的预后相关联．我们前期研究结果显示,EDAG与NPM1相结合并调节NPM1稳定性,但在AML病人体内EDAG与NPM1的关系,及EDAG与NPM突变体(NPMc⁺)的关系尚未明确．在本文中发现：在AML病人骨髓CD34⁺细胞中,敲低EDAG表达导致NPM1蛋白稳定性降低并提高了对柔红霉素的敏感性;EDAG虽不与突变体NPMc⁺相互作用,但在蛋白出核抑制剂(leptomycin B, LMB)作用下,过表达EDAG提高NPMc⁺蛋白稳定性;表达突变NPMc⁺的AML病人与表达NPM1蛋白的病人相比,其骨髓CD34⁺细胞对柔红霉素具有更高的敏感性,且敲低EDAG能微弱提高其敏感性．上述结果表明,EDAG在AML病人药物治疗中发挥的可能作用以及NPMc⁺ “逃脱”,使EDAG无法保护其稳定性,这提示了在AML病人药物治疗过程中EDAG的潜在作用,同时也提示,携带NPMc⁺蛋白的AML患者具有较好预后,可能与NPMc⁺蛋白“逃脱”出EDAG对其稳定性的保护有关．     

人红系分化相关基因高表达提高TF-1细胞系存活能力

目的：检测人红系分化相关基因（EDAG）对TF-1细胞株存活能力的影响。方法：采用电转染法将过表达EDAG的质粒高效转染TF-1细胞株,通过G418筛选得到过表达EDAG的TF-1细胞稳定株,用MTs法检测过表达EDAG的细胞稳定株在撤除细胞因子后的增殖情况,用流式细胞术检测细胞凋亡。结果：用表达GFP的质粒电转染TF-1细胞株,通过综合评价转染效率和细胞状态,确定最佳转染条件为1350V电压电击30ms,电击次数为1次;对得到的细胞稳定株进行检测,其内源EDAG的mRNA和蛋白水平均上调;将细胞稳定株在撤除细胞因子状态下培养,过表达EDAG后细胞存活能力增强、凋亡减少。结论：用电转染方式高效转染TF-1细胞,通过筛选得到过表达EDAG的稳定细胞株,并证实撤除细胞因子后过表达EDAG能提高TF-1细胞系的存活及抗凋亡能力。